1.一种桑蚕丝素蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

A）称取15g桑蚕丝并将其以1:45-55的浴比添加至去离子水中，加入2.25-3.75g碳酸钠，于90-98℃水浴下恒温脱胶55-65min，结束后调节pH至中性，反复操作多次，将脱胶后的桑蚕丝加入去离子水中浸泡，然后烘干；

B）将450-550mL异辛烷与900-1100mL正辛醇混合，搅拌混匀得到混合油性溶剂，称取

0.3-0.5mol的双（2－乙基己基）琥珀酸酯磺酸钠，0.3-0.5mol的聚乙烯基吡啶季铵盐溶于

450-550mL前述混合油性溶剂中；

C）称取1.5g碳酸钠和2.9g碳酸氢钠，加入到700-800mL去离子水中，搅拌溶解后定容至

1000mL，调节pH至9.5-9.7，得到碳酸盐缓冲溶液；取步骤A）中烘干后的桑蚕丝5g溶于45-

55mL碳酸盐缓冲溶液中，搅拌至完全溶解后加入至45-55mL步骤B）所得的混合油性溶剂中，混合均匀，再搅拌处理，然后离心处理，取上层溶液备用；

D）称取29.2g氯化钠，加入到450-550mL去离子水中，搅拌溶解后定容至1000mL，调节pH至9.4-9.5，取步骤C）所得上层溶液，按体积比0.9-1.1:1与氯化钠溶液混合，混匀后搅拌处理，然后离心处理，取下层水相；

E）取步骤D）所得下层水相，倒入透析袋中进行透析，透析后对透析袋中剩余溶液进行冷冻干燥，对干燥后获得的样品进行研磨，得到桑蚕丝素蛋白完全抗原，备用；

F）用生理盐水溶解步骤E）所得桑蚕丝素蛋白完全抗原，控制浓度为1-2 mg/mL，然后与QuickAntibody-Rabbit8W按体积比0.9-1.1:1混合，制得抗原佐剂混合溶液；选取2只大白兔进行初次免疫，用抗原佐剂混合溶液对每只兔的后大腿和皮下进行多点注射，在完成初次免疫后的第3周使用同样的抗原佐剂混合溶液对兔子进行皮下多点注射，进行加强免疫；

第5周选取免疫后效价相对较高的大白兔进入单克隆抗体制备；

G）用0.4-0.6 mg步骤E）所得桑蚕丝素蛋白完全抗原对选取的大兔进行静脉注射，7天后在无菌条件下取出脾脏，在无菌培养皿中将脾脏清理干净，用1640培养液冲洗，将洗净后的脾脏放入无菌皿中，加入1640培养液10mL，将脾脏碾碎过筛网，然后用1640培养液悬浮，在10000-14000 rpm下离心4-6 min，移除上清液，再洗涤一次，得到细胞悬液，并将其浓度稀释为含有1×108个脾淋巴细胞的悬液，备用，在细胞融合试验前5天，另行取骨髓瘤细胞进行传代培养；

H）取步骤G）培养得到的脾淋巴细胞和骨髓瘤细胞按1.8-2.2:1的数量比混匀，加培养液后在10000-14000 rpm下离心4-6 min，弃上清液，在35-39℃水浴中恒温加热，并缓缓加入聚乙二醇-1500，再加入1640培养液稀释，在10000-14000 rpm下离心，弃上清后将细胞用

20%HAT选择培养液悬浮；

I）步骤H）中细胞融合10天后，用间接ELISA法选出分泌抗体呈阳性，抗体分泌能力强，细胞生长状态良好的杂交瘤细胞，用HAT培养基扩大培养后，用有限稀释法在96孔板内进行克隆化，选择单个细胞集落孔的培养上清作抗体检测，阳性者用同样方法再次克隆，直至克隆后有杂交瘤细胞生长的抗体分泌阳性率为100%；利用筛选出的细胞进行大转生产，收集兔单克隆抗体进入纯化阶段；

J）pH 7.4的PBS溶液的制备；

K）对步骤I）中所得兔单克隆抗体进行纯化：用10mL，0.5mol/L的NaCl溶液和10mL，

0.05mol/L，pH7.4的PBS溶液对蛋白柱进行清洗，清洗流速为58-62 mL/h；用30mL，0.05mol/L，pH7.4的PBS溶液将收集到的兔单克隆抗体稀释，稀释后上样，重复上样一次；用20mL，

0.05mol/L，pH7.4的PBS溶液清洗柱子，清洗的流速为115-125 mL/h，使其在280nm处的紫外吸收接近基线；用0.5mol/L的NaCl溶液和0.05mol/L，pH7.4的PBS溶液进行洗脱；洗脱完成后用0.05mol/L，pH7.4的PBS溶液洗涤多肽柱，获得纯化后的桑蚕丝素蛋白单克隆抗体，在

1-5℃下储存备用。

2.如权利要求1所述的一种桑蚕丝素蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤A)中，将脱胶后的桑蚕丝加入至180-220mL去离子水中浸泡1.5-2.5h，然后在55-65℃下烘干。

3.如权利要求1所述的一种桑蚕丝素蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤C）和步骤D）中，搅拌时间为4-6min，离心速率为11000-13000r/min，离心时间为8-12min。

4.如权利要求1所述的一种桑蚕丝素蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤E）中，透析袋的分子截留量为8000，透析过程中每5-7h换一次水，透析2-3天。

5.如权利要求1所述的一种桑蚕丝素蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤F）中，所述大白兔为14-16周龄。

6.如权利要求1所述的一种桑蚕丝素蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤F）中，初次免疫和加强免疫时抗原佐剂混合溶液的注射量为100μL。

7.如权利要求1所述的一种桑蚕丝素蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤J）中，所述pH 7.4的PBS溶液的制备方法为：称取0.27 g磷酸二氢钾，1.42 g磷酸氢二钠，8 g氯化钠和 0.2 g氯化钾，加入到800 mL去离子水中，然后混合搅拌直到全部溶解，用1000 mL的容量瓶进行定容，调节溶液的pH为7.4。

8.如权利要求1-7之一所述方法制得的桑蚕丝素蛋白单克隆抗体在文物样品质地鉴定中的应用，其特征在于方法如下：取待检文物的部分作为检测样品，对检测样品提取蛋白后干燥粉碎；对其用1wt%的牛血清白蛋白溶液配制成1 μg/mL的浓度在酶标板中包被11-13h，每孔用200 μL的pH 7.4磷酸盐缓冲溶液洗涤三次；用1wt%的牛血清白蛋白溶液在35-39℃下封闭110-130min；每孔用

200 μL的pH 7.4磷酸盐缓冲溶液洗涤三次，然后将桑蚕丝素蛋白单克隆抗体分别用1wt%的牛血清白蛋白溶液稀释1:240000，1:60000，1：20000，1:10000，1:5000，1:1000，1:200倍，每孔加入100 μL桑蚕丝素蛋白单克隆抗体稀释液，35-39℃下孵育50-70min，用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液洗涤5次；每孔加入100 μL 的辣根过氧化酶标二抗，35-39℃下孵育55-65min，所述二抗采用1wt%的牛血清白蛋白稀释5000倍；最后每孔加入100 μL的1wt%的四甲基联苯胺溶液于黑暗处显色，9-11min后，加入100 μL，2mol/L的H2SO4 终止反应；用酶标仪测定 OD450nm，当OD值达到阳性标准时就可以确定检测样品中含有桑蚕丝；根据此标准，可以判断桑蚕丝素蛋白的存在。