1.一种基于免疫痕迹法鉴别古代丝织品残片蚕丝种类的方法，其特征在于采用如下步骤：

1）荧光碳点的制备：将红薯碎块和KH2PO4浸入蒸馏水中，于水热反应釜内反应，取出反应液，经超声、抽滤、透析得到荧光碳点溶液，之后经冷冻干燥，得到荧光碳点粉末；

2）荧光碳点标记蚕丝丝素蛋白二抗的制备：将荧光碳点分散在PBS缓冲液中，加入碳化二亚胺后，分别加入桑蚕丝和柞蚕丝丝素蛋白二抗，制得荧光碳点标记桑蚕丝二抗和荧光碳点标记柞蚕丝二抗；

3）分别称取等质量已被混淆的由桑蚕丝、柞蚕丝和蓖麻蚕丝制作的古代纺织品残片作为样品，小心用去离子水清洗，去除表面污染物，烘干，分别标记为A，B，C三组；

4）将A，B，C三组样品以1:95-105的浴比在含有0.4-0.6wt% Na2PO4和0.2-1.2wt%C17H35COONa的混合溶液中煮沸25-35min，进行脱胶处理，共脱胶两次；脱胶之后，样品用去离子水小心搓洗4次以上，放入烘箱干燥；

5） 将A，B，C三组古代丝织品残片以1:45-55的浴比浸入[AMIM]Cl离子液体中，加热反应，冷却；加入PM13-碱性蛋白酶粉末恒温孵育5-7h，进行灭酶，得到三组丝素蛋白/离子液体溶液A、B、C；

6）待丝素蛋白/离子液体溶液冷却至室温，加入无水乙醇，反复浸泡，使丝素蛋白析出，对混合物进行真空抽滤，向滤出的丝素蛋白中加入去离子水，反复浸泡后过滤，分别得到丝素蛋白提取液A、B、C；将三组丝素蛋白提取液在1-5℃条件下用透析袋透析10-14 h，除去小分子杂质；对透析后的丝素蛋白提取液进行真空浓缩，在2500-3500rpm、温度8-12℃条件下浓缩至终体积约为200μL，得到丝素蛋白浓缩液A、B、C；

7）SDS-PAGE凝胶电泳：分别量取45-55μL丝素蛋白浓缩液A、B、C，用CB 9.6缓冲液稀释至4.5-5.5mL，在98-102℃条件下加热4-6min，进行变性处理；冷却后至室温后，将三种样品和蛋白质Marker加入制备好的免染胶加样孔中，在电解槽中加满电解液，电泳完成后，在成像系统中观察电泳图像；本实验中一次制作两张样品胶，记为胶1、胶2；

8）电转移：将电泳后的胶平铺在经甲醇和电转缓冲液处理过的PVDF膜上，夹在滤纸和海绵中间组装成转运夹层，放入湿式转膜装置中，恒流转膜；可得到两张电转移膜，记为膜

1、膜2；

9）膜成像：电转移完成后，取出PVDF膜，放入凝胶成像系统中成像，观察蛋白条带转移情况；

10）封闭：取出PVDF膜，用14-16mL的TBS液洗膜4-6min，用封闭液在室温条件下处理50-

70min；

11）免疫处理：用抗体稀释液以950-1050:1的体积比稀释桑蚕丝一抗，将膜1浸没在一抗稀释液中，室温条件下摇床孵育1 2 h；取出膜1后用TBST液洗膜，之后浸入8-12mL稀释的~荧光碳点标记的桑蚕丝二抗液中室温条件下孵育1-25 h；膜2用柞蚕丝抗体进行同样处理；

12）发光显色：直接将免疫处理后的膜1、膜2在凝胶成像系统中成像，利用荧光碳点在紫外光照射下发射荧光的性能，得到免疫印迹图像；膜1中得到荧光条带为桑蚕丝纺织品残片，膜2中得到荧光条带的为柞蚕丝纺织品残片，则另一样品即为蓖麻蚕丝纺织品残片。

2.根据权利要求1所述一种基于免疫痕迹法鉴别古代丝织品残片蚕丝种类的方法，其特征是：步骤1）中，所述荧光碳点的制备方法具体为：称取1.8-2.2g红薯块茎碎块和5.5-

6.5g KH2PO4，加入8-12mL蒸馏水，将混合溶液倒入水热反应釜中密封，置于180~220℃烘箱中加热10 15 h，冷却至室温后，取出反应液，超声10min，用0.22μm微孔膜抽滤，得到浅黄色~的荧光碳点液体；将得到的溶液用截留分子量 1000的透析袋透析20-28 h以除去其他小分子杂质；最后对纯化的碳点溶液进行冷冻干燥，可得到荧光碳点粉末。

3.根据权利要求1所述一种基于免疫痕迹法鉴别古代丝织品残片蚕丝种类的方法，其特征是：步骤2）中，荧光碳点标记桑蚕丝二抗和荧光碳点标记柞蚕丝二抗的制备方法具体如下：将荧光碳点、碳化二亚胺和二抗加入到8-12mmol/L的PBS缓冲液中，在室温条件下搅拌2 3 h后，用PBS缓冲液对溶液进行多次洗涤离心，即可得到荧光碳点标记的桑蚕丝素蛋~白二抗和柞蚕丝素蛋白二抗。

4.根据权利要求1所述一种基于免疫痕迹法鉴别古代丝织品残片蚕丝种类的方法，其特征是：步骤5）中，所述PM13-碱性蛋白酶的制备：向95-105mL的0.1M的硼酸钠缓冲溶液中加入0.10-0.20g碱性蛋白酶和3.5-4.0g的MW15000的梳状PEG，在1-5℃条件下缓慢搅拌0.5-

1.5h，在外加45-55mL 1mmol/L HCl的条件下超滤除去未反应的PM13，重复三次，将滤液进行冷冻干燥，得到PM13-碱性蛋白酶粉末。

5.根据权利要求1所述一种基于免疫痕迹法鉴别古代丝织品残片蚕丝种类的方法，其特征是：步骤7）中，电泳具体操作为；先恒压80V，8-12min后蛋白进入分离胶，调整恒定电压为120V，15-25min后电泳完成，取出凝胶，观察电泳图像。

6.根据权利要求1所述一种基于免疫痕迹法鉴别古代丝织品残片蚕丝种类的方法，其特征是：步骤8）中，电转移操作中，使用的PVDF膜先用甲醇浸泡50-70s，再用电转缓冲液浸泡；所用的滤纸、海绵需要用电转缓冲液浸润，按照海绵—滤纸—电泳凝胶—PVDF膜—滤纸—海绵的顺序组装转运夹层，恒流转膜是在100mA恒流下转膜1 2 h；本操作采用湿法转~膜，转移过程中放热，需将转膜装置放在冰浴中。

7.根据权利要求1所述一种基于免疫痕迹法鉴别古代丝织品残片蚕丝种类的方法，其特征是：步骤10）中，孵育一抗和二抗后，室温下在摇床上用TBST液洗膜三次，每次4-6min。

8.根据权利要求1所述一种基于免疫痕迹法鉴别古代丝织品残片蚕丝种类的方法，其特征是：步骤6）中，透析袋的截留分子量为1000。

9.根据权利要求1所述一种基于免疫痕迹法鉴别古代丝织品残片蚕丝种类的方法，其特征是：步骤10）中，所述封闭液为5wt%脱脂奶粉。

10.根据权利要求1所述一种基于免疫痕迹法鉴别古代丝织品残片蚕丝种类的方法，其特征是：步骤11）中，所述抗体稀释液为TBST液。