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专利号: 2017107081291
申请人: 陕西师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于DNA凝胶电泳图和mtDNA:nDNA值鉴别新鲜牛奶和复原牛奶的方法,其特征在于它由以下步骤组成:(1)从待测样品中提取牛基因组DNA;

(2)设计并合成牛线粒体DNA上的12S rRNA基因的特异性引物:上游引物:5’-CGC GGT CAT ACG ATT AAC CC-3’下游引物:5’-AAC CCT ATT TGG TAT GGT GCT T-3’(3)设计并合成牛核DNA上的β-globin基因的特异性引物:

上游引物:5’-CGG CGG CGG GCG GCG CGG GCT GGG CGG GAA GGC CCA TGG CAA GAA GG-3’下游引物:5’-GCC GGC CCG CCG CGC CCG TCC CGC CGC TCA CTC AGC GCA GCA AAG G-3’(4)对步骤(1)提取的牛基因组DNA进行琼脂糖凝胶电泳,根据各自电泳条带的差异,对待测样品进行初步定性:DNA琼脂糖凝胶电泳图条带亮且无拖尾及弥散现象,说明待测样品是新鲜牛奶,DNA琼脂糖凝胶电泳图条带稍暗且拖尾及弥散现象严重,说明待测样品为复原牛奶;

(5)采用步骤(1)提取的牛基因组DNA为模板,分别对步骤(2)和(3)的特异性引物进行实时荧光定量PCR扩增,同时扩增12S rRNA基因和β-globin基因,获得各自的Ct值,根据公式mtDNA:nDNA=2-(Ct12S rRNA-Ctβ-globin)计算出mtDNA:nDNA值,当mtDNA:nDNA值为20~100,说明待测样品为新鲜牛奶,当mtDNA:nDNA值为120~2000,说明待测样品为复原牛奶;

结合上述步骤(4)和(5)的检测结果即可实现新鲜牛奶和复原牛奶的准确鉴别。

2.根据权利要求1所述的基于DNA凝胶电泳图和mtDNA:nDNA值鉴别新鲜牛奶和复原牛奶的方法,其特征在于:在步骤(5)中,所述PCR扩增的条件为:95℃预变性10min;95℃变性

30s,60℃退火1min,72℃延伸1min,40个循环。