1.一种基于DNA凝胶电泳图和mtDNA:nDNA值鉴别新鲜牛奶和复原牛奶的方法,其特征在于它由以下步骤组成:(1)从待测样品中提取牛基因组DNA;
(2)设计并合成牛线粒体DNA上的12S rRNA基因的特异性引物:上游引物:5’-CGC GGT CAT ACG ATT AAC CC-3’下游引物:5’-AAC CCT ATT TGG TAT GGT GCT T-3’(3)设计并合成牛核DNA上的β-globin基因的特异性引物:
上游引物:5’-CGG CGG CGG GCG GCG CGG GCT GGG CGG GAA GGC CCA TGG CAA GAA GG-3’下游引物:5’-GCC GGC CCG CCG CGC CCG TCC CGC CGC TCA CTC AGC GCA GCA AAG G-3’(4)对步骤(1)提取的牛基因组DNA进行琼脂糖凝胶电泳,根据各自电泳条带的差异,对待测样品进行初步定性:DNA琼脂糖凝胶电泳图条带亮且无拖尾及弥散现象,说明待测样品是新鲜牛奶,DNA琼脂糖凝胶电泳图条带稍暗且拖尾及弥散现象严重,说明待测样品为复原牛奶;
(5)采用步骤(1)提取的牛基因组DNA为模板,分别对步骤(2)和(3)的特异性引物进行实时荧光定量PCR扩增,同时扩增12S rRNA基因和β-globin基因,获得各自的Ct值,根据公式mtDNA:nDNA=2-(Ct12S rRNA-Ctβ-globin)计算出mtDNA:nDNA值,当mtDNA:nDNA值为20~100,说明待测样品为新鲜牛奶,当mtDNA:nDNA值为120~2000,说明待测样品为复原牛奶;
结合上述步骤(4)和(5)的检测结果即可实现新鲜牛奶和复原牛奶的准确鉴别。
2.根据权利要求1所述的基于DNA凝胶电泳图和mtDNA:nDNA值鉴别新鲜牛奶和复原牛奶的方法,其特征在于:在步骤(5)中,所述PCR扩增的条件为:95℃预变性10min;95℃变性
30s,60℃退火1min,72℃延伸1min,40个循环。