1.一种SERS增强的可控链状组装体检测凝血酶的方法,其特征在于包括如下步骤:(1)Au@Ag纳米粒子修饰凝血酶的一段适配体
将新合成的Au@Ag纳米粒子在7000r/min的转速下离心10min,去除上清,用0.01M pH7.2的PBS缓冲液将纳米粒子进行重悬并浓缩两倍,测得纳米粒子的浓度为20nM,然后将
29bp的凝血酶适配体DNA分子加入到Au@Ag纳米粒子溶液中,使得其终浓度为50nM,在室温下孵育4h,将纳米粒子在7000r/min条件下进行离心,以除去未结合的DNA分子,再用PBS缓冲液将纳米粒子进行重悬;
29bp的适配体DNA序列:5’-SH-AGTCCGTGGTAGGGCAGGTTGGGGTGACT-3’;
(2)Ag纳米粒子修饰凝血酶的另一段适配体
将新合成的Ag纳米粒子在10000r/min的条件下离心,去除上清并用0.01M pH7.2的PBS缓冲液将纳米粒子进行重悬,并进行5倍浓缩,测得Ag纳米粒子的浓度为20nM,将15bp的凝血酶适配体DNA分子加入到Ag纳米粒子溶液中,使得其终浓度为50nM,在室温下孵育4h,将纳米粒子在10000r/min条件下进行离心,以除去未结合的DNA分子,再用PBS缓冲液将纳米粒子进行重悬;
15bp的适配体DNA序列:5’-SH-GGTTGGTGTGGTTGG-3’;
(3)链状纳米粒子的组装以及SERS信号进行凝血酶的检测
在步骤(1)和步骤(2)制备的DNA修饰的纳米粒子中加入终浓度为2 10μM的信标分子,~在室温下孵育2h后,将纳米粒子进行离心以去除未结合的信标分子,再用结合缓冲液将两种纳米粒子进行重悬;取等体积的两种纳米粒子溶液进行充分混合,然后将其分装到PCR管中,每管100μL,在每管中分别加入浓度为0pg/mL、0.001pg/mL、0.005pg/mL、0.01pg/mL、0.05pg/mL、0.1pg/mL、0.5pg/mL、1pg/mL的凝血酶分子,在室温下孵育30 60min后,测定~每管中SERS信号的强度。
2.根据权利要求1所述的一种SERS增强的可控链状组装体检测凝血酶的方法,其特征在于所述的步骤(1)中Au@Ag纳米粒子的粒径为50nm,Au核的粒径为20nm,Ag壳的厚度为
15nm。
3.根据权利要求1所述的一种SERS增强的可控链状组装体检测凝血酶的方法,其特征在于所述的Ag纳米粒子的粒径为20nm。
4.根据权利要求1所述的一种SERS增强的可控链状组装体检测凝血酶的方法,其特征在于所述的信标分子为对氨基苯硫酚4-ATP。
5.根据权利要求4所述的一种SERS增强的可控链状组装体检测凝血酶的方法,其特征在于所述的4-ATP的浓度为5μM。
6.根据权利要求1所述的一种SERS增强的可控链状组装体检测凝血酶的方法,其特征在于所述的步骤(4)中的结合缓冲液为含150mM甘氨酸、10mM KCl、pH8.5的0.01M Tris缓冲液。
7.根据权利要求1所述的一种SERS增强的可控链状组装体检测凝血酶的方法,其特征在于所述的步骤(4)中凝血酶和适配体修饰的纳米粒子的孵育时间为40min。