1.miR-24-1-5p在制备诊疗结直肠肿瘤生物制剂中的应用,其特征在于,所述的miR-
24-1-5p的成熟RNA序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,miR-24-1-5p作为分子标志物在检测miR-
24-1-5p在结直肠肿瘤组织中的表达中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,方法如下:取结直肠肿瘤组织样本,提取RNA,以RNA为模板,使用miRNA cDNA第一链合成试剂盒对miRNA进行加Poly(A)尾并反转录成cDNA,以cDNA为模板,分别加入针对mmu-miR-24-1-5p的特异性引物Fm和针对has-miR-
24-1-5p的特异性引物Fh,分别在荧光定量PCR仪上进行扩增,U6作为内参基因;通过荧光定量PCR分别测定组织样本中miR-24-1-5p扩增的CT值;
所述的特异性引物Fm序列为:5'-AGTGCCTACTGAGCTGATATCAGT-3';
所述的特异性引物Fh序列为:5’-GTGCCTACTGAGCTGATATCAGT-3’;
内参基因U6的引物Fu序列为:5'-ATTGGAACGATACAGAGAAGATT-3';
PCR反应条件:95℃ 10分钟;95℃ 15秒;60℃ 1分钟,重复45个循环。
4.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,miR-24-1-5p在制备治疗结直肠肿瘤药物中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述的miR-24-1-5p的制备方法包括如下步骤:
1)提取DNA;
2)以提取的DNA为模板,以特异性引物FORWARD和REVERSE进行PCR扩增,得到PCR产物;
FORWARD序列为:5'-CCGCTCGAGCAACAGGGTTTTCCAAGTCTAC-3';
REVERSE序列为:5’-GGAAGATCTTCACCTAAGTCGTGTGAAATCATGTGGTA-3’
PCR反应条件:94℃ 3分钟;98℃ 10秒;65℃ 1分钟;72℃ 10分钟重复35个循环;
3)将PCR产物和表达载体在XholⅠ和BglⅡ酶切位点进行双酶切,经酶切连接转化入表达载体,得到含miR-24-1-5p的重组质粒;
4)将含miR-24-1-5p的重组质粒导入大肠杆菌DH5α感受态细胞中,得重组菌种,对重组菌种进行抗性筛选,得到稳定表达重组质粒的菌种。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,步骤2)获得的PCR产物的RNA序列如SEQ ID NO.3所示。
7.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述的表达载体为病毒表达载体或真核表达载体。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述的真核表达载体为pCMV-myc、pcDNA3.0、pcDNA3.1或pcDNA3.1-HA表达载体。