1.一种麦芽寡糖基海藻糖合成酶的突变体,其特征在于,包含了将来源于嗜酸热硫化叶菌(Sulfolobus acidocaldarius)的麦芽寡糖基海藻糖合成酶的第81、263、284、432、
439、583、585、586、611或615位的氨基酸中的一个或多个进行取代得到的突变体。
2.根据权利要求1所述的一种麦芽寡糖基海藻糖合成酶的突变体,其特征在于,所述突变体是将第81位置的甘氨酸(Gly)变成丝氨酸(Ser),突变体命名为G81S;
或,所述突变体是将第263位置的谷氨酸(Glu)变成甘氨酸(Gly),突变体命名为E263G;
或,所述突变体是将第284位置的苯丙氨酸(Phe)变成缬氨酸(Val),突变体命名为F284V;
或,所述突变体是将第432位置的甘氨酸(Gly)变成天冬氨酸(Asp),突变体命名为G432D;
或,所述突变体是将第439位置的苏氨酸(Thr)变成丙氨酸(Ala),突变体命名为T439A;
或,所述突变体是将第583位置的苯丙氨酸(Phe)变成亮氨酸(Leu),突变体命名为F583L;
或,所述突变体是将第585位置的谷氨酰胺(Gln)变成精氨酸(Arg),突变体命名为Q585R;
或,所述突变体是将第586位置的甘氨酸(Gly)变成天冬氨酸(Asp),突变体命名为G586D;
或,所述突变体是将第611位置的异亮氨酸(Ile)变成苏氨酸(Thr),突变体命名为I611T;
或,所述突变体是将第615位置的丝氨酸(Ser)变成甘氨酸(Gly),突变体命名为S615G;
或,所述突变体是将第284位置的苯丙氨酸(Phe)变成缬氨酸(Val),同时将第439位置的苏氨酸(Thr)变成丙氨酸(Ala),得到F284V/T439A;
或,所述突变体是将第284位置的苯丙氨酸(Phe)变成缬氨酸(Val),同时将第586位置的甘氨酸(Gly)变成天冬氨酸(Asp),得到F284V/G586D;
或,所述突变体是将第439位置的苏氨酸(Thr)变成丙氨酸(Ala),同时将第586位置的甘氨酸(Gly)变成天冬氨酸(Asp),得到T439A/G586D;
或,所述突变体是将第439位置的苏氨酸(Thr)变成丙氨酸(Ala),同时将第585位置的谷氨酰胺(Gln)变成精氨酸(Arg),得到T439A/Q585R;
或,所述突变体是将第432位置的甘氨酸(Gly)变成天冬氨酸(Asp),同时将第586位置的甘氨酸(Gly)变成天冬氨酸(Asp),得到G432D/G586D;
或,所述突变体是将第81位置的甘氨酸(Gly)变成丝氨酸(Ser)、将第284位置的苯丙氨酸(Phe)变成缬氨酸(Val)、将第615位置的丝氨酸(Ser)变成甘氨酸(Gly),得到G81S/F284V/S615G;
或,所述突变体是将第284位置的苯丙氨酸(Phe)变成缬氨酸(Val)、将第439位置的苏氨酸(Thr)变成丙氨酸(Ala)、将第586位置的甘氨酸(Gly)变成天冬氨酸(Asp),得到F284V/T439A/G586D;
或,所述突变体是将第81位置的甘氨酸(Gly)变成丝氨酸(Ser)、将第284位置的苯丙氨酸(Phe)变成缬氨酸(Val)、将第439位置的苏氨酸(Thr)变成丙氨酸(Ala)、将第615位置的丝氨酸(Ser)变成甘氨酸(Gly),得到G81S/F284V/T439A/S615G;
或,所述突变体是将第81位置的甘氨酸(Gly)变成丝氨酸(Ser)、将第284位置的苯丙氨酸(Phe)变成缬氨酸(Val)、将第586位置的甘氨酸(Gly)变成天冬氨酸(Asp),得到将第615位置的丝氨酸(Ser)变成甘氨酸(Gly),得到G81S/F284V/G586D/S615G;
或,所述突变体是将第263位置的谷氨酸(Glu)变成甘氨酸(Gly)、将第284位置的苯丙氨酸(Phe)变成缬氨酸(Val)、将第583位置的苯丙氨酸(Phe)变成亮氨酸(Leu)、将第611位置的异亮氨酸(Ile)变成苏氨酸(Thr)、将第615位置的丝氨酸(Ser)变成甘氨酸(Gly),得到E263G/F284V/F583L/I611T/S615G。
3.编码权利要求1或2所述突变体的基因。
4.携带权利要求3所述基因的载体或重组细胞。
5.制备权利要求1或2所述突变体的方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)根据确定的突变位点,设计定点突变的突变引物,以携带麦芽寡糖基海藻糖合成酶基因的载体为模板进行定点突变;构建含有编码突变体的基因的质粒载体;
(2)将突变体质粒转化进宿主细胞;
(3)挑选阳性克隆进行发酵培养,离心收集细胞,细胞破壁上清液即为麦芽寡糖基海藻糖合成酶突变体的粗酶液。
6.权利要求1或2所述突变体在生产海藻糖中的应用。
7.权利要求3所述基因在生产海藻糖中的应用。
8.权利要求4所述载体或重组细胞在生产海藻糖中的应用。
9.生产海藻糖的酶制剂,其特征在于,包括权利要求1或2所述突变体。