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专利号: 2017108650463
申请人: 浙江海洋大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种制备鲤鱼肌肉细胞外结缔组织扫描电镜样品的方法,包括前固定、后固定、脱水、割断和置换、冷冻干燥、观察,其特征在于:所述的前固定步骤为:将鲤鱼背部肌肉避开隔膜切成块,放入前固定液中固定,然后吸出前固定液,再加入NaOH溶液震荡,吸出NaOH溶液,最后用磷酸缓冲液清洗;

所述的后固定步骤为:将前固定后样品放入单宁酸溶液中固定,然后用0.09-0.11M磷酸缓冲液清洗9-12min,反复清洗3-4次,再用四氧化锇固定,最后用0.09-0.11M磷酸缓冲液清洗9-12min,反复清洗3-4次,再用冷冻保护剂溶液清洗9-12min,反复清洗3-4次,即得后固定样品;

所述的脱水步骤为:将后固定样品用体积浓度为50-90%的甲醇按浓度梯度由低到高顺序逐次脱水14-16min,最后用98-100%甲醇反复脱水3-4次,每次脱水14-16min;

所述的割断和置换步骤为:将脱水样品放入98-100%甲醇溶液中,利用液态氮快速冻结,冻结的试样用刀片迅速切断,放入叔丁醇中进行置换3-4次,每次14-16min;

所述的冷冻干燥步骤为:将割断、置换后的样品利用冻结干燥装置进行冷冻干燥处理,即得干燥样品;

所述的观察步骤为:将干燥好的样品粘附在样品台上,进行喷金处理,然后用扫描电子显微镜进行拍照记录,观察样品的表面和内部结构;

所述的前固定步骤中NaOH溶液浓度为1.8-2.2M,震荡3-4d,每22-24h更换一次NaOH溶液;

所述的后固定步骤中冷冻保护剂的浓度为2-3%,冷冻保护剂为海藻糖和糖苷,其重量比为1:0.6-0.8;

所述的后固定步骤中糖苷中左旋糖苷和右旋糖苷的比为1:83-92。

2.根据权利要求1所述的一种制备鲤鱼肌肉细胞外结缔组织扫描电镜样品的方法,其特征在于:所述的前固定步骤中前固定液中仲甲醛浓度为1.9-2.1%、戊二醛浓度为2.3-

2.6%、磷酸缓冲液浓度为0.09-0.11M,pH为7.0-7.3,前固定液固定4-5d,每22-24h更换一次固定液。

3.根据权利要求1所述的一种制备鲤鱼肌肉细胞外结缔组织扫描电镜样品的方法,其特征在于:所述的前固定步骤中磷酸缓冲液的浓度为0.09-0.11M,清洗10-14h。

4.根据权利要求1所述的一种制备鲤鱼肌肉细胞外结缔组织扫描电镜样品的方法,其特征在于:所述的后固定步骤中单宁酸溶液的浓度为1.8-2.1%,固定1.5-2.5h,四氧化锇的浓度为0.8-1.1%,固定1.5-2.5h。