1.一种辨别鲤鱼三种肌肉细胞的组织学方法,包括冻结、冻结、前处理、ATPase反应、发色、光学显微镜观察,其特征在于:所述的前处理步骤为:将装有前处理溶液的前处理容器保持温度恒定,然后将样品切片放入前处理容器中处理,处理后倒出前处理溶液,再用清洗液清洗。
2.根据权利要求1所述的一种辨别鲤鱼三种肌肉细胞的组织学方法,其特征在于:所述的前处理步骤中前处理溶液含有0.09-0.11M抑胰肽酶缓冲液和17-19mM CaCl2,前处理溶液的pH为10.40-10.60。
3.根据权利要求1所述的一种辨别鲤鱼三种肌肉细胞的组织学方法,其特征在于:所述的前处理步骤中恒温温度为18-22℃,样品切片恒温处理20-30min。
4.根据权利要求1所述的一种辨别鲤鱼三种肌肉细胞的组织学方法,其特征在于:所述的前处理步骤中清洗液的组成为:17-19mM CaCl2、48-52mM KCl和0.09-0.11M 2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲液,清洗液的pH为9.35-9.45,清洗2-3次,每次清洗13-16min。
5.根据权利要求1所述的一种辨别鲤鱼三种肌肉细胞的组织学方法,其特征在于:所述的冻结步骤为:将从鲤鱼背部取的样品块用冷冻保护剂清洗后放在样品台上,滴加冰冻切片包埋剂,再将样品与样品台放入装有异戊烷的容器中,并将容器放入液氮中急速冷冻至冻结点即可。
6.根据权利要求5所述的一种辨别鲤鱼三种肌肉细胞的组织学方法,其特征在于:所述的冻结步骤中冷冻保护剂的浓度为2-3%,冷冻保护剂为海藻糖和糖苷,其重量比为1:0.6-
0.8,糖苷中左旋糖苷和右旋糖苷的比为1:83-92。
7.根据权利要求1所述的一种辨别鲤鱼三种肌肉细胞的组织学方法,其特征在于:所述的切片步骤为:将达到冻结点后的样品在-20至-30℃下保持50-70min,然后切出厚度为9-
11µm的切片,将收集切好的样品移至载玻片上,室温下干燥即得样品切片。
8.根据权利要求1所述的一种辨别鲤鱼三种肌肉细胞的组织学方法,其特征在于:所述的ATPase反应步骤中反应液的组成为:17-19mM CaCl2、48-52mM KCl、3.0-3.2mM ATP和
0.09-0.11M 2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲液,反应液的pH为9.35-9.45,反应液的温度为18-
22℃,反应时间为25-35min。
9.根据权利要求1所述的一种辨别鲤鱼三种肌肉细胞的组织学方法,其特征在于:所述的发色步骤为:将ATPase反应切片用CaCl2溶液浸泡后用蒸馏水清洗,浸渍;然后加入CoCl2溶液浸泡,结束后用蒸馏水清洗,浸渍;再用硫化铵溶液浸泡,倒出硫化铵溶液后,结束后用蒸馏水清洗,浸渍,即得发色切片。
10.根据权利要求9所述的一种辨别鲤鱼三种肌肉细胞的组织学方法,其特征在于:所述的发色步骤中CaCl2溶液浓度为0.8-1.1%,浸泡3-4min;CoCl2溶液浓度为1.8-2.1%,浸泡
3-4min;硫化铵溶液浓度为0.8-1.1%,浸泡50-70s。