1.一种近红外荧光探针化合物,其化学结构式如式(1)所示,简称DCM-P。
。
2.一种制备权利要求1所述红外荧光探针化合物的方法,包括以下步骤:(1)以4-(二氰基亚甲基)-2-(4-羟基苯乙烯基)-4H-1-苯并吡喃为原料,在原料中加入吡啶甲酸、4-二甲氨基吡啶、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和二氯甲烷,混合均匀,得混合液;所述4-(二氰基亚甲基)-2-(4-羟基苯乙烯基)-4H-1-苯并吡喃简称为DCM-OH,所述4-二甲氨基吡啶简称为DMAP,所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐简称为EDC,所述混合液配方比例为:(2)将上述混合液在20-40℃下搅拌5-24小时;
(3)反应结束后,有黄色沉淀物析出,黄色沉淀物经过滤分离得到纯净的探针DCM-P。
3.根据权利要求2所述制备方法,其特征是,步骤(1)所述混合液配方比例为:
4.根据权利要求2或3所述制备方法,其特征是,步骤(1)所述混合液配方比例为:
5.根据权利要求2或3所述制备方法,其特征是,步骤(2)是在在20-40℃下中搅拌12-24小时。
6.权利要求1-5之一所述近红外荧光探针化合物在铜离子检测中的应用。
7.根据权利要求6所述应用,其特征是,所述铜离子包括环境水样中的铜离子与活细胞中外源性铜离子。
8.根据权利要求7所述应用,其特征是,应用所述近红外荧光探针化合物检测环境水样中的铜离子,包括以下步骤:-3
(1)准确称取一定量DCM-P溶于色谱纯的二甲亚砜中,配制成浓度为1.0×10 mol/L的DCM-P储备液,并置于2℃-5℃的温度下保存;
(2)准确称取一定量的硝酸铜分别溶于去离子水中,配制成浓度为1.0×10-2mol/L的铜离子储备液,并置于2℃-5℃的温度下保存;用去离子水稀释不同体积的铜离子储备液,得到不同浓度的铜离子标准溶液;
(3)在多个2mL的测试管中分别加入1mL的二甲亚砜,0.5mL的磷酸盐缓冲液,再分别加入0.02mL的步骤(1)所述DCM-P储备液,然后分别加入步骤(2)所述不同浓度的铜离子标准溶液,用去离子水定容到2mL,控制此时体系中DMSO:H2O=4:6v/v-6:4v/v,待混合液反应至少30分钟后,用荧光分光光度计测定各溶液的荧光强度,确定荧光强度与铜离子浓度的定量关系并制作标准曲线;
(4)在2mL的测试管中加入1mL的DMSO,0.5mL的磷酸盐缓冲液,再加入0.02mL的步骤(1)所述DCM-P储备液,然后加入待测溶液,用去离子水定容到2mL,待混合液反应一段时间后测定其荧光强度,根据标准曲线确定待测液中铜离子的浓度。
9.根据权利要求8所述应用,其特征是,所述磷酸盐缓冲液为10mM、pH=7.4的Na2HPO4-NaH2PO4体系。
10.根据权利要求8所述应用,其特征是,所述检测体系中DMSO与水相的体积比为5:5v/v。
11.根据权利要求8所述应用,其特征是,所述荧光分光光度计参数设置为激发狭缝
10nm,发射狭缝10nm,激发波长560nm,发射波长677nm,扫描范围695-850nm。
12.根据权利要求7所述应用,其特征是,应用所述近红外荧光探针化合物检测活细胞中外源性铜离子,包括以下步骤:(1)将活细胞置于含有10%胚胎牛血清和1.0×10-5mol/L探针DCM-P的DMEM培养基中,在37℃和5%二氧化碳条件下培养30分钟;
(2)先用吸管吸出培养基,再用37℃的磷酸盐缓冲液洗涤细胞3次,然后用荧光倒置显微镜进行成像;
-5
(3)向步骤(2)所述细胞中添加1.0×10 mol/L铜离子,继续培养30分钟,再用37℃的磷酸盐缓冲液洗涤细胞3次,然后用荧光倒置显微镜进行成像。