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专利号: 2017109348610
申请人: 武汉轻工大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-12-04
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种黄曲霉毒素B1毒性的检测方法,其特征在于,包括如下步骤:配制含有不同黄曲霉毒素B1浓度的培养液;

用含有不同黄曲霉毒素B1浓度的培养液培养斑马鱼胚胎24~120h;

观察记录斑马鱼胚胎的死亡率,以及由斑马鱼胚胎孵化的斑马鱼幼鱼的孵化率、畸形率、心包囊和卵黄囊面积、幼鱼体面积,计算心包囊/幼体面积比和卵黄囊/幼体面积比,判断黄曲霉毒素B1对斑马鱼胚胎的毒性作用。

2.如权利要求1所述的黄曲霉毒素B1毒性的检测方法,其特征在于,配制含有不同黄曲霉毒素B1浓度的培养液的步骤包括:将二甲基亚砜与养殖用水混合,制成二甲基亚砜储备液;

将黄曲霉毒素B1加入二甲基亚砜储备液中,通过超声波破碎获得黄曲霉毒素B1母液;

向黄曲霉毒素B1母液中加入养殖用水,制成黄曲霉毒素B1储备液;

取黄曲霉毒素B1储备液与二甲基亚砜储备液和养殖用水混合,制成含有不同黄曲霉毒素B1浓度的培养液;

其中,所述养殖用水为曝气加热的自来水。

3.如权利要求2所述的黄曲霉毒素B1毒性的检测方法,其特征在于,所述超声波破碎的超声波频率为20~25kHz,超声波破碎的时间为8~10min。

4.如权利要求1所述的黄曲霉毒素B1毒性的检测方法,其特征在于,用含有不同黄曲霉毒素B1浓度的培养液培养斑马鱼胚胎24~120h的步骤之前还包括:将成年斑马鱼按照雌雄比为1:2~1:3的比例移至产卵盒;

将产卵盒放入恒温箱中保温过夜后,自然交配并收集受精卵;

将受精卵放入恒温箱中进行恒温培养后,在解剖镜下挑选发育正常的原肠胚作为斑马鱼胚胎。

5.如权利要求4所述的黄曲霉毒素B1毒性的检测方法,其特征在于,将成年的斑马鱼按照雌雄比为1:2~1:3的比例移至产卵盒的步骤之前还包括:将斑马鱼置于具有恒温循环水系统的培养缸中饲养,其中,所述培养缸中的养殖用水为曝气加热的自来水,培养缸中的水温为26~30℃,水中溶氧大于5.0mg/L,pH为6.8~7.2,保持光照12~16h/黑暗8~12h的光照周期。

6.如权利要求4所述的黄曲霉毒素B1毒性的检测方法,其特征在于,将产卵盒放入恒温箱中保温过夜后,自然交配并收集受精卵的步骤中:所述保温过夜的温度为26~28℃,时间为10~14h。

7.如权利要求4所述的黄曲霉毒素B1毒性的检测方法,其特征在于,将受精卵放入恒温箱中进行恒温培养后,在解剖镜下挑选发育正常的原肠胚作为斑马鱼胚胎的步骤中:所述恒温培养的温度为26~28℃,时间为2.5~3.5h。

8.如权利要求1所述的黄曲霉毒素B1毒性的检测方法,其特征在于,用含有不同黄曲霉毒素B1浓度的培养液培养斑马鱼胚胎24~120h的步骤包括:将斑马鱼胚胎清洗后移入六孔板中;

向六孔板的孔中加入含有不同黄曲霉毒素B1浓度的培养液,放入恒温箱中恒温培养24~120h。

9.如权利要求8所述的黄曲霉毒素B1毒性的检测方法,其特征在于,向六孔板的孔中加入含有不同黄曲霉毒素B1浓度的培养液,放入恒温箱中恒温培养24~120h的步骤中:所述恒温培养的温度为26~28℃,每隔12h更换所述培养液。