1.一种检测Dam甲基转移酶的荧光化学传感器,其特征在于,所述荧光化学传感器包括:反应溶液I和反应溶液II;反应溶液I中包括Dam甲基转移酶检测探针,S-腺苷甲硫胺酸,限制性核酸内切酶DpnⅠ和Dam甲基转移酶反应缓冲液;反应溶液II包括辅助探针,三磷酸脱氧腺苷,末端转移酶(TdT),核酸内切酶IV,二氯化钴和末端转移酶缓冲液和SYBR Gold;
所述Dam甲基转移酶检测探针为一个具茎环结构的发夹DNA探针,两条茎结构互补形成双链DNA,所述双链DNA具有Dam甲基转移酶的识别位点;所述Dam甲基转移酶检测探针长度为37nt,所述Dam甲基转移酶检测探针的碱基序列为:5'-GAA GGA TCT TCT CGA CTT GCT GAA GAT CCT TCT TAA T-NH2-3';所述Dam甲基转移酶检测探针3'端进行氨基修饰;
所述Dam甲基转移酶的识别位点为5'-G-A-T-C-3'的回文序列;
所述辅助探针为一个近3'末端具有脱嘌呤嘧啶位点(AP位点)的富T单链DNA序列,所述辅助探针长度为26 nt,所述辅助探针的碱基序列为5'-TTT TTT TTTTTTTTTTTTTTX TTT TT-NH2-3',其中X代表脱嘌呤嘧啶位点,所述辅助探针3'端进行氨基修饰。
2.如权利要求1所述的荧光化学传感器,其特征在于,所述Dam甲基转移酶反应缓冲液包括:50毫摩尔每升Tris-HCl缓冲液,10毫摩尔每升EDTA,5毫摩尔每升2-巯基乙醇,pH
7.5。
3.如权利要求1所述的荧光化学传感器,其特征在于,所述末端转移酶缓冲液包括:50毫摩尔每升醋酸钾,20毫摩尔每升Tris-Ac,10毫摩尔每升醋酸镁,pH 7.9。
4.权利要求1-3任一项所述荧光化学传感器以非疾病诊断治疗为目的的用于Dam甲基转移酶检测的方法,其特征在于,步骤包括:
1)将待测样品加入反应溶液I中进行孵育反应,然后进行高温灭活处理;
2)向步骤1)高温灭活处理后的溶液中加入反应溶液II进行聚合反应;
3)对步骤2)反应后的溶液进行荧光化学检测,实现对待测样品中Dam甲基转移酶的定量分析。
5.如权利要求4所述的检测方法,其特征在于,步骤1)中孵育反应条件为:37℃,孵育时间为1.5 3 h;高温灭活处理温度为80℃,处理时间为10 30 min。
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6.如权利要求5所述的检测方法,其特征在于,步骤1)中孵育时间为2 h。
7.如权利要求5所述的检测方法,其特征在于,步骤1)中高温灭活处理时间为20 min。
8.权利要求1-3任一项所述荧光化学传感器在非疾病诊断治疗目的的定量检测Dam甲基转移酶和/或筛选Dam甲基转移酶抑制剂或激活剂中的应用。
9.权利要求5-7任一项所述检测方法在非疾病诊断治疗目的的定量检测Dam甲基转移酶和/或筛选Dam甲基转移酶抑制剂或激活剂中的应用。