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专利号: 2017109624926
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种产两性霉素B的重组结节链霉菌,其特征在于所述重组结节链霉菌是将SEQ ID NO.1所示卡那霉素抗性基因序列导入结节链霉菌(Streptomyces nodosus)ZJB2016050获得的;所述结节链霉菌(Streptomyces nodosus)ZJB2016050保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏日期2017年7月17号,保藏编号CCTCC NO:M 2017426,保藏地址为中国武汉,武汉大学,邮编430072。

2.如权利要求1所述产两性霉素B的重组结节链霉菌,其特征在于所述重组结节链霉菌还包含SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8所示外源基因。

3.如权利要求2所述产两性霉素B的重组结节链霉菌,其特征在于所述重组结节链霉菌是将SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.7所示基因序列导入结节链霉菌ZJB2016050获得的。

4.如权利要求2所述产两性霉素B的重组结节链霉菌,其特征在于所述重组结节链霉菌是将SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.8所示基因序列导入结节链霉菌(Streptomyces nodosus)ZJB16050获得的。

5.一种权利要求1所述产两性霉素B的重组结节链霉菌在提高两性霉素B产量中的应用。

6.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述应用是将产两性霉素B的重组结节链霉菌接种至发酵培养基,25-30℃,220rpm发酵培养,获得含两性霉素B的发酵液,将发酵液分离纯化,获得两性霉素B;所述发酵培养基终浓度组成为:葡萄糖60-80g/L,牛肉膏5-10g/L,大豆蛋白粉5-10g/L,棉子粉8-12g/L,CaCO3 5-10g/L,KH2PO4 0.1-0.4g/L,溶剂为自来水,pH 

7.0。

7.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述发酵培养在发酵罐中进行,发酵条件为

25-30℃,发酵罐压力0.05MPa,搅拌转速200-500rpm,通气比0.08-1.5vvm。

8.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述产两性霉素B的重组结节链霉菌在发酵培养前先进行种子培养,再将种子液以体积浓度2-10%的接种量接种至发酵培养基,所述种子培养为:将产两性霉素B的重组结节链霉菌接种至GYM平板,28℃培养7天,取颜色发灰黑色的孢子,使用棉花棒将表面孢子洗脱至无菌水中,将洗下的孢子悬液用含有棉花的注射器过滤,12000rpm离心5min后去上清液,沉淀加入无菌水重悬后,12000rpm离心5min重新洗脱一次,用无菌水重悬作为孢子悬液;所述GYM平板终浓度组成:葡萄糖4g/L,酵母粉4g/L,麦芽提取物10g/L,碳酸钙2g/L,琼脂18g/L,溶剂为自来水,pH7.2;将孢子悬液接种至种子培养基中,28℃,220rpm培养46h,获得种子液;所述种子液培养基终浓度组成为:蛋白胨10-

20g/L,NaCl 5-10g/L,葡萄糖10-15g/L,酵母粉5-10g/L,CaCO3 0.5-1g/L,溶剂为自来水,pH 7.0。