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专利号: 2017109765534
申请人: 皖西学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 医学或兽医学;卫生学
更新日期:2023-12-04
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.霍山石斛提取物在制备改善血脂代谢紊乱药物中的应用,其特征在于,所述应用是通过影响脂质代谢信号通路起作用,该药物用于缓解糖尿病病情;其中,所述霍山石斛提取物的获取方法为:(1)取霍山石斛切片,50℃ 烘干后研磨成粉末;80% 乙醇脱去色素,50℃水提5 h;95% 乙醇,过夜醇沉;60% 蒸干,得霍山石斛粗多糖;

(2)采取Sevage联合木瓜蛋白酶法脱蛋白,接着进行透析、真空冷冻干燥,得霍山石斛多糖;采取Sevage联合木瓜蛋白酶法脱蛋白的具体方法为:在获取的霍山石斛粗多糖中加入2%木瓜蛋白酶,50℃水浴2 h,再按照霍山石斛粗多糖溶液:正丁醇:氯仿体积比例为25:

1:5 加入反应试剂,反复操作4 -5 次,直到无蛋白层;

(3)选择阴离子交换层析法对霍山石斛多糖进行分离纯化,收集目标洗脱液,浓缩至

100-200 mg 生药/mL,滤过即得;

具体工艺为:

A、DEAE-52离子柱层析

选择阴离子交换层析法对霍山石斛多糖进行分离纯化,填充介质为DEAE-52;DEAE-52柱层析的流程如下:①准备工作

霍山石斛多糖:称量0.1g的多糖,溶于50mL蒸馏水中,配制浓度为20mg/mL多糖溶液;梯度洗脱液的配制:配制0.1mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L NaCl和0.5mol/L NaOH;

②梯度洗脱

DEAE-52进行预处理并填充至层析柱中,启动自动收集器,按设置好的程序运行1mL/min,5min/管,洗脱液按照NaCl溶液浓度从低到高依次进行,最后换用0.5mol/L NaOH;

③苯酚-硫酸跟踪检测每个试管中多糖的含量,绘制洗脱曲线;收集到三个峰值下的洗脱液,将其分别命名为DPI、DPII、DPIII;

④将三个组分DPI、DPII和DPIII分别进行细胞实验,检测其是否具有降血糖的活性,其中,DPII的活性最佳,将其用于后续实验;

B、SephadexG-100柱层析

对DEAE-52纯化后的DPII组分做进一步的分离纯化,此时填充介质为更改为SephadexG-100;参照DEAE-52柱层析操作步骤,配制0.05mol/L NaCl为洗脱液,洗脱速度

1mL/min,4min/管,绘制洗脱曲线,将DPII组分经SephadexG-100进一步的洗脱后,只得到一个洗脱峰;收集该洗脱峰下洗脱液,浓缩至100-200mg生药/mL,滤过,作为最终所需的霍山石斛提取物;

C、成分分析

对最终获得的霍山石斛提取物进行成分分析,根据GCMS-QP2010气相色谱-质谱联用得出的离子峰碎片及单糖组成可得出:DPII组分主要链接方式由1,3,4-Rha,1,4-p-Glc,1,3,

4-Glc,还有阿拉伯糖和木糖组成的糖苷键,分子量为48365Da。

2.根据权利要求1所述的霍山石斛提取物在制备改善血脂代谢紊乱药物中的应用,其特征在于,所述霍山石斛提取物通过上调载脂蛋白L、载脂蛋白C 、脂质转运蛋白、ABC转运蛋白-1来调控脂质的利用和去向,同时上调低密度脂蛋白受体和β-乳球蛋白来改善血脂的水平,降低糖尿病高血脂的症状。

3.根据权利要求1所述的霍山石斛提取物在制备改善血脂代谢紊乱药物中的应用,其特征在于,所述霍山石斛提取物通过影响脂肪羧酸化酶和脂肪酸去饱和酶的表达来调控脂质代谢紊乱,控制脂肪过度堆积造成的肥胖。

4.根据权利要求1所述的霍山石斛提取物在制备改善血脂代谢紊乱药物中的应用,其特征在于,所述药物是以霍山石斛提取物为活性成分的药物组合物。

5.根据权利要求4所述的霍山石斛提取物在制备改善血脂代谢紊乱药物中的应用,其特征在于,所述药物组合物含药物活性物质10-100 mg,其余为药学上可接受的载体。

6.根据权利要求5所述的霍山石斛提取物在制备改善血脂代谢紊乱药物中的应用,其特征在于,所述药学上可接受的载体具体包括:甘露醇、山梨醇、山梨酸、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素A、维生素C、维生素E、维生素D、氮酮、EDTA 二钠、EDTA 钙钠,一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、丙二醇、乙醇、吐温60-80、司班-80、蜂蜡、羊毛脂、液体石蜡、十六醇、琼脂、三乙醇胺、碱性氨基酸、尿素、尿囊素、碳酸钙、碳酸氢钙、聚乙二醇、β-环糊精、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、植物油、聚乙二醇磷脂、油酸、EDTA。

7.根据权利要求1所述的霍山石斛提取物在制备改善血脂代谢紊乱药物中的应用,其特征在于,所述药物是任何药用剂型。

8.根据权利要求7所述的霍山石斛提取物在制备改善血脂代谢紊乱药物中的应用,其特征在于,所述药用剂型具体包括:糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、冲剂、丸剂、散剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂。

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