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专利号: 2017111419525
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种酶催化正丁基‑β‑D‑葡萄糖苷转糖苷制备红景天苷的方法,其特征在于,采用β‑葡萄糖苷酶催化剂催化β‑D‑葡萄糖和正丁醇进行反应,在反应48小时后收集反应液,将反应混合物置于沸水浴中10min,减压抽滤去除沉淀;然后将滤液在80℃、0.01Mpa下蒸馏去除正丁醇和水后得到正丁基‑β‑D‑葡萄糖苷;将正丁基‑β‑D‑葡萄糖苷溶解于叔丁醇中配置成重量百分比为6~10%的正丁基‑β‑D‑葡萄糖苷溶液,然后加入含酪醇的磷酸氢二钠‑柠檬酸缓冲液和β‑葡萄糖苷酶催化剂,于恒温振荡器上振荡反应8~16小时;反应结束后,在反应混合物加入10倍体积的甲醇摇匀,用0.45μm膜过滤获得红景天苷,经C18柱高效液相法检测后可知红景天苷产率达到17~35%;

其中,所述的β‑葡萄糖苷酶为杏仁β‑葡萄糖苷酶、农杆菌(Agrobacterium)β‑葡萄糖苷酶、白腐真菌(Phanerochaete  chrysosporium)β‑葡萄糖苷酶、海栖热袍菌(Thermotogamaritima)β‑葡萄糖苷酶中的任一种;

β‑葡萄糖苷酶催化剂采用如下方法制备:将β‑葡萄糖苷酶用磷酸氢二钠‑柠檬酸缓冲液配置成蛋白质的质量百分比为5~20%的缓冲溶液;在缓冲溶液中加入质量百分比浓度为0.5~2.5%的环氧氯丙烷后振荡反应0.5~2小时,缓冲溶液中蛋白质与环氧氯丙烷的质量比为1:0.5~3;反应结束后将反应液在3000~5000rpm条件下离心5~10分钟,收集沉淀冷冻干燥,即为β‑葡萄糖苷酶催化剂。

2.根据权利要求1所述的一种酶催化正丁基‑β‑D‑葡萄糖苷转糖苷制备红景天苷的方法,其特征在于,C18柱高效液相法检测方法如下:在配有反相C18色谱柱的1525型液相色谱仪上检测产品中红景天苷含量,其中反相C18色谱柱的型号是汉邦Megres C18250mm×

4.6mm,5μm;1525型液相色谱仪购自美国Waters公司;分析柱的温度为36℃,流动相为甲醇水溶液,甲醇水溶液中甲醇:水=3:7,流动相流速为0.8mL/min;检测器为2996型紫外检测器,波长230nm,进样量为20μL。