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专利号: 201711141953X
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种酶法制备正丁基-β-D-葡萄糖苷的方法,其特征在于,采用β-葡萄糖苷酶催化剂催化底物溶液中的β-D-葡萄糖和正丁醇进行反应;在反应5~9小时后收集反应液,用3倍体积的乙醚、叔丁醇、乙酸乙酯萃取3次,合并萃取液,用无水MgSO4干燥后,在0.01MPa下减压蒸馏得到产品;产品经C18柱高效液相法检测,以葡萄糖计,正丁基-β-D-葡萄糖产率达到90~95%;

其中,β-葡萄糖苷酶催化剂采用如下方法制备:将β-葡萄糖苷酶用0.1~0.2M、pH值为

5.5~8.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液配置成蛋白质重量百分比为5~20%的缓冲溶液;在缓冲溶液中加入质量百分比浓度为0.5~2.5%的丁二酰氯后振荡反应0.5~2小时,溶液中蛋白质与丁二酰氯的质量比为1:0.5~3,反应结束后将反应液在3000~5000rpm离心5~10分钟,收集沉淀冷冻干燥后获得β-葡萄糖苷酶催化剂;

底物溶液的制备采用如下方法:将β-D-葡萄糖和正丁醇按摩尔比1:1~3均匀混合,加- - -

入1-烷基-3-甲基咪唑的BF4、Br、I盐形成的离子液体,所述的1-烷基-3-甲基咪唑为CnMIm+,n=2-10;在80~100℃加热搅拌至形成透明液体,离子液体中β-D-葡萄糖的质量百分比为10~30%。

2.根据权利要求1所述的一种酶法制备正丁基-β-D-葡萄糖苷的方法,其特征在于,β-葡萄糖苷酶为杏仁β-葡萄糖苷酶、农杆菌Agrobacteriumβ-葡萄糖苷酶、白腐真菌Phanerochaete chrysosporiumβ-葡萄糖苷酶、海栖热袍菌Thermotoga maritimaβ-葡萄糖苷酶中的任一种。

3.根据权利要求1所述的一种酶法制备正丁基-β-D-葡萄糖苷的方法,其特征在于,在

2mL底物溶液中加入5U-10U的β-葡萄糖苷酶催化剂和去离子水,去离子水的体积比为0.2~

0.5%,在50~60℃下反应5~9小时,收集反应液。

4.根据权利要求1所述的一种酶法制备正丁基-β-D-葡萄糖苷的方法,其特征在于,产物分离采用如下方法:用3倍体积的乙醚、叔丁醇、乙酸乙酯萃取反应液3次,合并萃取液,用无水MgSO4干燥后,在0.01MPa下减压蒸馏得到产品;产品经C18柱高效液相法检测,以葡萄糖计,正丁基-β-D-葡萄糖得率达到90~95%。