欢迎来到知嘟嘟! 联系电话:13095918853 卖家免费入驻,海量在线求购! 卖家免费入驻,海量在线求购!
知嘟嘟
我要发布
联系电话:13095918853
知嘟嘟经纪人
收藏
专利号: 2017111611337
申请人: 浙江海洋大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
价格&联系人
年费信息
委托购买

摘要:

权利要求书:

1.一种鲽形目鳎科鱼类核糖体内转录间隔区2通用引物,其特征在于,所述鲽形目鳎科鱼类核糖体内转录间隔区2通用引物包括:  正向引物SEQ  ID  NO.1:5'  - DACAACTCTTAGCGGTGGATCA - 3',反向引物SEQ ID NO.2:5' - GCTCTTCCCTCTTCACTCG - 

3'。

2.根据权利要求1所述的一种鲽形目鳎科鱼类核糖体内转录间隔区2通用引物,其特征在于,所述鲽形目鳎科鱼类包括但不限于:蛾眉条鳎、缨鳞条鳎、带纹条鳎、日本条鳎、东方箬鳎、眼斑豹鳎、圆鳞鳎、褐斑栉鳞鳎、角鳎、卵鳎、塞内加尔鳎和卡氏大鼻鳎。

3.一种如权利要求1所述的鲽形目鳎科鱼类核糖体内转录间隔区2通用引物的设计方法,其特征在于,从Genbank数据库中下载目前所有已经公布的鳎科鱼类5.8S rDNA和28S rDNA序列,对这些序列进行多重比对,分别在3’端和5’端找出比较保守的序列用于设计扩增ITS2的通用引物。

4.一种如权利要求1所述的鲽形目鳎科鱼类核糖体内转录间隔区2通用引物的扩增方法,其特征在于,所述鲽形目鳎科鱼类核糖体内转录间隔区2通用引物的扩增方法包括以下步骤:(1)DNA抽提试剂盒法提取鲽形目鳎科鱼类的总DNA;

(2)采用权利要求1中所述的鲽形目鳎科鱼类核糖体内转录间隔区2通用引物;

(3)以待测鲽形目鳎科鱼类的总DNA作为模版,进行PCR扩增;

(4)扩增引物用1.0%琼脂糖凝胶电泳,试剂盒法割胶回收扩增片段,测序及序列拼接。

5.根据权利要求4所述的一种鲽形目鳎科鱼类核糖体内转录间隔区2通用引物的扩增方法,其特征在于,所述步骤(1)中为避免鲽形目鳎科鱼类肠道内容物污染,舍去其头颈部,只从其尾部提取DNA。

6.根据权利要求4所述的一种鲽形目鳎科鱼类核糖体内转录间隔区2通用引物的扩增方法,其特征在于,步骤(3)所述PCR扩增的反应体系组成为:2.5mM的dNTP2μL、10×TaqDNA聚合酶Buffer2.5μL、10μM的正向引物SEQ ID NO.1和反向引物SEQ ID NO.2各1μL、5U/μL的TaqDNA聚合酶0.2μL、100g/μL的DNA模版溶液1μL及灭菌双蒸水17.3μL;

所述PCR扩增条件为:95℃预变性5min,随后95℃变性30s,56℃退火30s,72℃延伸60s,共进行35个循环,最后进行72℃延伸5min,4℃条件下保存。

7.根据权利要求4所述的一种鲽形目鳎科鱼类核糖体内转录间隔区2通用引物的扩增方法,其特征在于,所述待测的鲽形目鳎科鱼类包括但不限于:蛾眉条鳎、缨鳞条鳎、带纹条鳎、日本条鳎、东方箬鳎、眼斑豹鳎、圆鳞鳎、褐斑栉鳞鳎、角鳎、卵鳎、塞内加尔鳎和卡氏大鼻鳎。