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专利号: 2017111721197
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种脂肪酶醇解活力的荧光检测方法,其特征在于所述方法为:以4-甲基伞形酮丁酸酯和C1~C4的烷基醇为底物,以脂肪酶为催化剂,在有机溶剂中,于200r/min、25~50℃条件下进行醇解反应,反应完全后,获得含4-甲基伞形酮的反应液,将反应液离心,取上清液测试其在激发波长330nm和吸收波长390nm处的荧光值,根据4-甲基伞形酮标准曲线计算反应液中4-甲基伞形酮的浓度,进而获得脂肪酶的酶活;所述脂肪酶的酶活定义为:每l min催化1μmol的4-甲基伞形酮丁酸酯转化为4-甲基伞形酮的酶量为1个酶活力单位;所述

4-甲基伞形酮标准曲线是将4-甲基伞形酮用醇解反应所用的有机溶剂配制成浓度梯度,测试其在激发波长330nm和吸收波长390nm处的荧光值,以浓度梯度为横坐标,以吸光值为纵坐标制成。

2.如权利要求1所述脂肪酶醇解活力的荧光检测方法,其特征在于所述4-甲基伞形酮丁酸酯和C1~C4的烷基醇分别用相同有机溶剂配制成0.1~10mM4-甲基伞形酮丁酸酯溶液和0.5~25mM C1~C4的烷基醇溶液。

3.如权利要求2所述脂肪酶醇解活力的荧光检测方法,其特征在于所述0.1~10mM4-甲基伞形酮丁酸酯溶液和0.5~25mM C1~C4的烷基醇溶液体积比为1:1-5;所述脂肪酶用量以4-甲基伞形酮丁酸酯溶液体积计为0.01~0.10g/ml。

4.如权利要求1所述脂肪酶醇解活力的荧光检测方法,其特征在于所述有机溶剂为甲醇、乙醇或叔丁醇。

5.如权利要求1所述脂肪酶醇解活力的荧光检测方法,其特征在于所述C1~C4的烷基醇为甲醇。

6.如权利要求5所述脂肪酶醇解活力的荧光检测方法,其特征在于所述4-甲基伞形酮丁酸酯用叔丁醇配制成0.5mM4-甲基伞形酮丁酸酯溶液,所述甲醇用叔丁醇配制成2.5mM甲醇溶液,所述4-甲基伞形酮丁酸酯溶液与甲醇溶液体积比为1:1;所述脂肪酶用量以4-甲基伞形酮丁酸酯溶液体积计为0.02g/ml。

7.如权利要求1所述脂肪酶醇解活力的荧光检测方法,其特征在于4-甲基伞形酮标准曲线制备方法为:用醇解反应相同有机溶剂配制梯度浓度为0.01mM、0.02Mm、0.03mM、

0.04mM、0.05mM、0.06mM、0.08mM的4-甲基伞形酮溶液,测试在激发波长330nm和吸收波长

390nm处的荧光强度值,然后以4-甲基伞形酮溶液浓度为横坐标,荧光强度值为纵坐标绘制标准曲线。

8.如权利要求1所述脂肪酶醇解活力的荧光检测方法,其特征在于所述醇解反应在

200r/min、30℃下水浴反应10min。