1.一株防治苹果果实轮纹病的季也蒙毕赤酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y-1,于
2015年12月31日保藏于:中国典型培养物保藏中心,保藏号:CCTCC NO:M2015814。
2.一种利用权利要求1所述的季也蒙毕赤酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y-1制备的生防菌剂。
3.权利要求2所述的生防菌剂在防治葡萄病害中的应用,所述葡萄病害为由病原真菌引起的葡萄白腐病、灰霉病、青霉病、褐腐病和炭疽病;
所述葡萄白腐病病原菌为白腐垫壳孢(Coniella diplodiella)、灰霉病病原菌为灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)、青霉病病原菌为青霉菌(Penicillium spp)、褐腐病病原菌为链核盘菌(Monilinia spp)和炭疽病病原菌为胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于:所述的季也蒙毕赤酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y-1用于增强植物体内防御酶的活性,所述的防御酶为CAT、PPO、SOD和POD。
5.根据权利要求3所述的应用,其特征在于:使用时将季也蒙毕赤酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y-1制备成菌悬液。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于:制备得到的季也蒙毕赤酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y-1菌悬液通过喷施或浸润的方式施用于葡萄。
7.根据权利要求5所述的应用,其特征在于:制备得到的季也蒙毕赤酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y-1菌悬液浓度为103~108cfu·mL-1。
8.根据权利要求2所述的生防菌剂,其特征在于,所述生防菌剂的制备方法如下:
1)培养基的制备:
酵母浸出粉胨葡萄糖(YPD)琼脂培养基:酵母提取物(Yeast Extract)10g,蛋白胨(Peptone)20g,溶解于900mL水中,加入20g琼脂粉,121℃高压蒸汽灭菌20min后,加入100mL已灭菌的20%葡萄糖溶液;
酵母浸出粉胨葡萄糖(YPD)液体培养基:酵母提取物10g,蛋白胨20g,溶解于900mL水中,121℃高压蒸汽灭菌20min后,加入100mL已灭菌的20%葡萄糖溶液,分装于250mL三角瓶中,装液量为80mL;
2)季也蒙毕赤酵母Y-1菌株的活化:将菌株按无菌操作要求划线接种于YPD琼脂培养基中,30℃恒温培养2-3d;
3)季也蒙毕赤酵母Y-1菌株的液体培养:挑取步骤2)中活化的Y-1菌株的单菌落,接种于瓶装量为80mL/250mL的YPD液体培养基中,150r·min-1,30℃恒温震荡培养24h,得到菌株Y-1发酵种子液,将所述发酵种子液按1:100的接种量接种到所述的YPD液体培养基中,30℃
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恒温震荡培养48h,得到浓度为10cfu·mL 的季也蒙毕赤酵母Y-1菌株的细胞培养液;所述细胞培养液为生防菌剂。
9.根据权利要求2所述的生防菌剂,其特征在于,所述生防菌剂的制备方法如下:
1)培养基的制备:
酵母浸出粉胨葡萄糖(YPD)琼脂培养基:酵母提取物(Yeast Extract)10g,蛋白胨(Peptone)20g,溶解于900mL水中,加入20g琼脂粉,121℃高压蒸汽灭菌20min后,加入100mL已灭菌的20%葡萄糖溶液;
酵母浸出粉胨葡萄糖(YPD)液体培养基:酵母提取物10g,蛋白胨20g,溶解于900mL水中,121℃高压蒸汽灭菌20min后,加入100mL已灭菌的20%葡萄糖溶液,分装于250mL三角瓶中,装液量为80mL;
2)季也蒙毕赤酵母Y-1菌株的活化:将菌株按无菌操作要求划线接种于YPD琼脂培养基中,30℃恒温培养2-3d;
3)季也蒙毕赤酵母Y-1菌株的液体培养:挑取步骤2)中活化的Y-1菌株的单菌落,接种于瓶装量为80mL/250mL的YPD液体培养基中,150r·min-1,30℃恒温震荡培养24h,得到菌株Y-1发酵种子液,将所述发酵种子液按1:100的接种量接种到所述的YPD液体培养基中,30℃恒温震荡培养48h,得到浓度为107cfu·mL-1的季也蒙毕赤酵母Y-1菌株的细胞培养液;
4)将步骤3)中制备的细胞培养液,在4℃条件下,6000r·min-1离心10min,收集菌体沉淀用无菌水重新悬浮,得到108cfu·mL-1的菌悬液;
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5)稀释:将步骤4)中制备的10cfu·mL 的菌悬液稀释0-100倍;得到生防菌剂。