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专利号: 2017111918909
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一株产蛋白酶的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)S7,其特征在于,于2016年9月

27日保藏于中国典型培养物保藏中心,菌种保藏编号CCTCC NO:M2016532,保藏地址为武汉大学保藏中心。

2.应用权利要求1所述的枯草芽孢杆菌S7发酵生产水解牛乳过敏源β-乳球蛋白的蛋白酶的方法,其特征在于,所述蛋白酶是由草芽抱杆菌S7发酵生产,所述解牛乳过敏源β-乳球蛋白蛋白酶N端的十个氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求2所述的发酵方法,其特征在于,具体步骤如下:(1)将枯草芽抱杆菌S7接种至AM液体培养基或PDA液体培养基中培养得到种子液;

(2)将种子液按体积2-5%接种量接种于液体培养基PDA液体培养基中发酵培养得到发酵液。

(3)将发酵液离心,收集发酵液上清即为粗酶液。

4.根据权利要求3所述的发酵方法,其特征在于,所述AM液体培养基成分为:葡萄糖

10g/L,酵母粉5g/L,蛋白胨10g/L,MgSO40.5g/L,KH2PO42g/L,CaCl20.2g/L;所述PDA液体培养基成分为:葡萄糖20g/L,马铃薯200g/L。

5.根据权利要求3所述的发酵方法,其特征在于,所述步骤(1)中的培养为,在35-39℃,

180-260rpm培养10-16h得到种子液。

6.根据权利要求3所述的发酵方法,其特征在于,所述步骤(1)中的发酵培养为,在35-

39℃,180-260rpm发酵10-16h得到发酵液。

7.根据权利要求3-6任一发酵方法得到蛋白酶的分离纯化方法,其特征在于,具体步骤如下:(1)枯草芽孢杆菌S7发酵培养,获得的粗酶液;

(2)将粗酶液用质量分数为40-70%的硫铵酸梯度沉淀出一部分杂蛋白后,用磷酸缓冲液透析,用磷酸缓冲液平衡Q Sepharose fast-flow离子交换柱,上样,收集有酶活的蛋白峰,用磷酸缓冲液透析,磷酸缓冲液平衡凝胶柱,上样,洗脱,收集有酶活的组分,即得纯化后的蛋白酶。

8.权利要求7所述分离纯化方法,其特征在于,所述磷酸缓冲液为pH 6.0-9.0,40-60mM磷酸缓冲液。

9.权利要求7或8所述分离纯化方法,其特征在于,所述磷酸缓冲液为pH 8.0,50mM磷酸缓冲液。

10.权利要求2所述的蛋白酶在消除牛奶过敏源中的应用。