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专利号: 2017112551973
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种构建香蕉穿孔线虫伴生细菌介导的香蕉穿孔线虫生防工程菌的方法,其特征在于,是将具有杀线虫活性的生物酶的编码基因转化入香蕉穿孔线虫伴生细菌构建得到工程菌。

2. 根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述具有杀线虫活性的生物酶为蛋白酶PASE4,其编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

3. 根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述香蕉穿孔线虫伴生细菌为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)pf36,该菌株于2017年11月8日保藏于广东省微生物菌种保藏中心;保藏编号为GDMCC No:60278。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述转化的方式为载体转化法或接合转座法。

5. 根据权利要求4所述的方法,其特征在于,载体转化法的具体操作方法为,使用如SEQ ID NO:2~3所示引物扩增蛋白酶PASE4的编码基因,经过酶切后连接到广宿主表达载体pBBR1MCS-2;

接合转座法的具体操作方法为,使用如SEQ ID NO:4~5所示引物扩增蛋白酶PASE4的编码基因,经过酶切后连接到载体pUTmini-Tn5,得到重组质粒,将重组质粒在辅助菌E. coli DH5α协助下转移到受体荧光假单胞菌pf36中,并将蛋白酶PASE4的编码基因整合到受体荧光假单胞菌pf36基因组中。

6.权利要求1~5任一所述方法构建得到的香蕉穿孔线虫生防工程菌。

7.权利要求6所述的香蕉穿孔线虫生防工程菌或其发酵液在防治香蕉穿孔线虫中的应用。

8.权利要求6所述的香蕉穿孔线虫生防工程菌或其发酵液在制备防治香蕉穿孔线虫的制剂中的应用。

9.一种防治香蕉穿孔线虫的生防制剂,其特征在于,含有权利要求6所述香蕉穿孔线虫生防工程菌和/或其发酵液。

10.一种利用香蕉穿孔线虫伴生细菌介导的香蕉穿孔线虫防治方法,其特征在于,首先利用权利要求6所述方法构建得到香蕉穿孔线虫生防工程菌,然后利用该工程菌或其发酵液防治香蕉穿孔线虫。