1.一种检测AFB1的免标记便携式适配体传感器的制备方法,其特征在于按照下述步骤进行:
步骤1、磁性纳米粒子Fe3O4的制备;
步骤2、金包四氧化三铁核-壳结构磁性纳米粒子(Fe3O4@Au NPs)的制备;
步骤3、核酸适配体修饰的Fe3O4@Au纳米生物探针(Fe3O4@Au-apt)的制备;
步骤4、丝网印刷电极(SPCE)的预处理;
步骤5、免标记便携式适配体传感器的构建;
步骤6、电化学交流阻抗法检测AFB1。
2.根据权利要求1所述的一种检测AFB1的免标记便携式适配体传感器的制备方法,其特征在于步骤1中,磁性纳米材料Fe3O4的制备方法为:将FeCl3·6H2O溶解在乙二醇(EG)和一缩乙二醇(DEG)的混合溶液中,超声反应30min;然后,依次加入乙酸钠和聚乙二醇(PEG);
搅拌反应30min后,混合液被移至反应釜中,200℃反应3h;反应结束后冷却至室温,用乙醇和水洗涤数次,重新分散于50mL乙醇中,超声5min,备用;
步骤1中,所述FeCl3·6H2O、EG、DEG、乙酸钠和PEG的摩尔比为1:90:53:10:1。
3.根据权利要求1所述的一种检测AFB1的免标记便携式适配体传感器的制备方法,其特征在于步骤2中,Fe3O4@Au的制备方法为:取步骤1中制备的Fe3O4磁性纳米粒子分散液,加入丙氨基三乙氧基硅烷(APTS)室温下机械搅拌反应7h,磁分离并用乙醇洗涤数次,将产物重新分散于40mL水中;将HAuCl4溶液(1wt%)逐滴加入到上述分散液中,于100℃温度下回流反应30min,后逐滴加入柠檬酸钠溶液(1wt%),于100℃温度下回流反应3h后,将所得产物磁分离并水洗数次,重新分散于40mL水中备用;
步骤2中,所述Fe3O4纳米粒子分散液和APTS的体积比为100:1;所用HAuCl4溶液和柠檬酸钠溶液的体积比为1:2。
4.根据权利要求1所述的一种检测AFB1的免标记便携式适配体传感器的制备方法,其特征在于步骤3中,核酸适配体修饰的Fe3O4@Au纳米生物探针的制备方法为:首先取经过三(2-乙羧基)磷盐酸盐(TCEP)活化的新鲜AFB1(10μM)核酸适配体溶液加入到Fe3O4@Au NPs(1mg mL–1)的Tris-HCl缓冲溶液(50mM,pH 7.4)分散物中,37℃下振荡反应6h;采用外加磁场分离的方法,将磁控产物用Tris-HCl缓冲溶液反复洗涤数次以去除未反应的aptamer;再将其重新分散在2μM 6-巯基己醇(MCH)的溶液,37℃条件下反应1h,得到MCH封闭的纳米生物探针(Fe3O4@Au-apt),用10 mM Tris-HCl缓冲溶液洗涤数次去除未反应的MCH,将其重新分散在5mL的Tris-HCl缓冲溶液(50mM,pH 7.4)中,4℃保存备用;
步骤3中,所述核酸适配体溶液、Fe3O4@Au分散液和MCH溶液的体积比为1:50:50。
5.根据权利要求1所述的一种检测AFB1的免标记便携式适配体传感器的制备方法,其特征在于步骤3中,所用AFB1的核酸适配体序列为:5′-GTT GGG CAC GTG TTG TCT CTC TGT GTC TCG TGC CCT TCG CTA GGC CCA CA-SH-3′。
6.根据权利要求1所述的一种检测AFB1的免标记便携式适配体传感器的制备方法,其特征在于步骤4中,SPCE预处理方法为:在50μL含有0.5M H2SO4和0.1M KCl的溶液中对SPCE-1进行循环伏安扫描,扫描范围为-0.2~1.5V,扫描速率为100mV s ,扫描时间为5min,之后用二次水淋洗,氮气吹干,备用。
7.根据权利要求1所述的一种检测AFB1的免标记便携式适配体传感器的制备方法,其特征在于步骤5中,免标记便携式适配体传感器的构建步骤为:将步骤4中预处理过的SPCE的工作电极底部固定磁铁,并在其工作电极表面涂布20μL步骤3中制备的Fe3O4@Au-apt纳米生物探针的分散液,移除上层溶液,制得用于AFB1检测的适配体传感器(SPCE-Fe3O4@Au-apt)。
8.根据权利要求1所述的一种检测AFB1的免标记便携式适配体传感器的制备方法,其特征在于步骤6中,所述电化学适配体传感器检测AFB1的步骤如下:分别取10μL不同浓度的AFB1标准溶液滴涂在所制备的电化学适配体传感器的界面上,在37℃条件下孵育60min,之后将传感器界面用10mM pH=7.4的Tris-HCl缓冲液淋洗;将SPCE的三电极体系置于50μL阻抗液,扫描电化学阻抗图谱和循环伏安曲线,根据阻抗值与对应的AFB1标准样浓度建立标准曲线。
9.根据权利要求1所述的一种检测AFB1的免标记便携式适配体传感器的制备方法,其特征在于步骤6中,所述AFB1标准溶液浓度依次是0,0.01,0.02,0.05,0.1,0.5,1,5,10,30,
50,100ng mL-1;所述阻抗液包括:a.0.1M磷酸盐缓冲溶液,pH=7.4;b.5mM[Fe(CN)6]3-/4-;
c.0.1M KCl。
10.根据权利要求1所述的一种检测AFB1的免标记便携式适配体传感器的制备方法,–1
其特征在于步骤6中,所用Fe3O4@Au-apt的浓度为1mg mL ;
步骤6中,所使用的DNA储存液为10mM Tris-HCl缓冲溶液(pH 7.4,含有1.0mM EDTA),适配体与目标物结合缓冲溶液为10mM Tris-HCl缓冲溶液(pH 7.4,含有10mM NaCl和5.0mM MgCl2);步骤5中,所使用的Tris-HCl缓冲溶液浓度为10mM,pH=7.4。