1.一种胃蛋白酶制备苦味肽的方法,其特征在于,该方法包括如下步骤:
(1)制备上清液:清洗大黄鱼,然后去鳞,再用去离子水清洗后,将所述大黄鱼切成鱼块,将所述鱼块与缓冲液放入高速组织捣碎机中打浆并离心,取上清液加热至内源性酶失活,备用;
(2)酶水解制备苦味肽粗液:在所述上清液中加入质量浓度为10g/L的胃蛋白酶,混合搅拌均匀,置于水浴锅中,将pH调至3.5,然后酶解、冷却,调回pH至7.0,定容,离心,上清液即为苦味肽粗液,取所述苦味肽粗液备用;
(3)饱和透明质酸配制:将透明质酸钠盐加入至装有无菌水的器皿中,充分搅拌至形成透明粘性液体,在器皿口覆盖保鲜膜;
(4)通过非牛顿流体分离制备苦味肽粗浓缩液:在容器中加入所述苦味肽粗液,再加入与所述苦味肽粗液等体积的透明粘性液体,此时溶液的上层为所述透明粘性液体,下层为所述苦味肽粗液,将所述溶液经过离心或者静置的离心管收集组分,然后通过感官评定确定苦味肽的组分位置,收集苦味肽组分,获得苦味肽粗浓缩液。
2.根据权利要求1所述的胃蛋白酶制备苦味肽的方法,其特征在于:步骤(1)中所述鱼块为100g。
3.根据权利要求1所述的胃蛋白酶制备苦味肽的方法,其特征在于:步骤(1)中所述鱼块与缓冲液的质量比为1:5,所述缓冲液为0.1XPBS。
4.根据权利要求1所述的胃蛋白酶制备苦味肽的方法,其特征在于:步骤(1)中所述打浆的时间为5-10min,所述离心的转速为6000r/min,时间为5min,所述上清液加热的时间为
5min,温度为90℃。
5.根据权利要求1所述的胃蛋白酶制备苦味肽的方法,其特征在于:步骤(2)中所述水浴锅中水浴的温度为50-60℃,酶解时间为4h,酶解后升温至95℃灭酶15min,所述离心的转速为12000r/min,时间为10min。
6.根据权利要求1所述的胃蛋白酶制备苦味肽的方法,其特征在于:步骤(2)中所述pH通过1M的HCL调节。
7.根据权利要求1所述的胃蛋白酶制备苦味肽的方法,其特征在于:步骤(2)完成后,还进行苦味肽粗液感官评定,所述感官评定与步骤(4)中的感官评定的方式相同:由6-9名感官评定人,参加苦味肽的标准曲线建立,即单盲法依次判断出高、中、低苦味浓度,然后依次测试5-100mg咖啡因的感官苦味强度,以形成自身的苦味标准曲线。
8.根据权利要求1所述的胃蛋白酶制备苦味肽的方法,其特征在于:步骤(3)中所述透明粘性液体含有质量浓度为20g/L的透明质酸。
9.根据权利要求1所述的胃蛋白酶制备苦味肽的方法,其特征在于:步骤(4)中所述离心的转速为15000r/min,温度为4℃,时间为30min。
10.根据权利要求1-9任意一项所述的胃蛋白酶制备苦味肽的方法所制备的苦味肽在治疗哮喘疾病的食物中的应用。