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专利号: 2017113166140
申请人: 浙江海洋大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2024-07-25
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种鲻鱼鱼鳞铁螯合肽,其特征在于:所述螯合肽氨基酸序列为:Gly-Met-Ala-Gln-Met-Ala-Gly-Pro-Pro-Gly-Glu,ESI/MS检测分子量为974.12Da。

2.一种鲻鱼鱼鳞铁螯合肽的制备方法,其特征在于:所述方法包括以下步骤:

1)鲻鱼鱼鳞的预处理:取鲻鱼鱼鳞,加入NaOH溶液脱除非胶原蛋白,再加入EDTA溶液,经浸泡、干燥得脱钙鱼鳞;

2)鲻鱼鱼鳞胶原蛋白的制备:向脱钙鱼鳞中加入乙酸溶液并在4℃浸泡,分离得上清液,对上清液进行盐析,经分离得鲻鱼鱼鳞胶原蛋白;

3)鲻鱼鱼鳞的酶解:向胶原蛋白中加入超纯水,用盐酸调溶液pH为2.0~2.5,加入胃蛋白酶酶解,将溶液升温至90℃~95℃,保持10~15min,冷却至室温,用NaOH调溶液pH为9~

10,加入碱性蛋白酶酶解,得酶解产物;

4)鲻鱼鱼鳞铁螯合胶原肽的制备:通过3kDa超滤膜对酶解产物进行超滤,收集分子量小于3kDa部分,经树脂层析柱纯化得胶原肽混合物,胶原肽混合物依次经凝胶柱层析和反相高效液相色谱纯化,得到鲻鱼鱼鳞铁螯合肽。

3.根据权利要求2所述的一种鲻鱼鱼鳞铁螯合肽的制备方法,其特征在于:所述步骤2)中乙酸溶液的浓度为0.5mol/L,乙醇溶液与脱钙鱼鳞的料液比为1g:5~8mL。

4.根据权利要求2所述的一种鲻鱼鱼鳞铁螯合肽的制备方法,其特征在于:所述步骤3)中胃蛋白酶的加入量为胶原蛋白质量的0.8%~1.2%,碱性蛋白酶的加入量为胶原蛋白质量的1.0%~1.5%。

5.根据权利要求2所述的一种鲻鱼鱼鳞铁螯合肽的制备方法,其特征在于:所述步骤3)中在加入碱性蛋白酶后,在45~55℃酶解3~4h。

6.根据权利要求2所述的一种鲻鱼鱼鳞铁螯合肽的制备方法,其特征在于:所述步骤3)中胶原蛋白与超纯水的料液比为1g:15~20mL。

7.根据权利要求2所述的一种鲻鱼鱼鳞铁螯合肽的制备方法,其特征在于:所述步骤4)中凝胶柱层析过程为:将上述胶原肽混合物溶于双蒸水配成浓度为10~20mg/mL的溶液,经过葡聚糖凝胶LH-20柱层析分离,用双蒸水进行洗脱,根据220nm下的吸光度曲线收集洗脱组分,其中,具有最高铁螯合活性的峰为凝胶层析酶解物。

8.根据权利要求2所述的一种鲻鱼鱼鳞铁螯合肽的制备方法,其特征在于:所述步骤4)中反相高效液相色谱纯化过程为:将上述凝胶层析酶解物用双蒸水配成90~100μg/mL的溶液,利用RP-HPLC进行纯化,其中,反相高效液相色谱纯化条件为:进样量15~20μL,色谱柱为Zorbax C18,流动相为40%甲醇,洗脱速度为0.8~1.0mL/min,紫外检测波长为220nm。