1.一种基于单克隆抗体检测人PGRN的双夹心ELISA试剂盒,其特征在于,该试剂盒的内容物组成如下:96孔ELISA酶标板、包被抗体4F10、人PGRN标准蛋白、生物素标记的检测抗体
5B7-biotin、Avidin与HRP的交联蛋白、包被缓冲液、封闭液、样品及检测抗体稀释液、ELISA酶标板洗涤液、底物液和终止液。
2.如权利要求1所述的基于单克隆抗体检测人PGRN的双夹心ELISA试剂盒,其特征在于,所述包被抗体4F10是针对人PGRN中GrnA结构域的小鼠抗人单克隆抗体,工作浓度为10μg/mL。
3.如权利要求1所述的基于单克隆抗体检测人PGRN的双夹心ELISA试剂盒,其特征在于,所述生物素标记的检测抗体5B7-biotin是针对人PGRN中GrnB结构域的小鼠抗人单克隆抗体,工作稀释比例为1:4000。
4.如权利要求1所述的基于单克隆抗体检测人PGRN的双夹心ELISA试剂盒,其特征在于:所述的包被缓冲液为0.05M的碳酸盐缓冲液,pH为9.6;
所述封闭液为含体积分数为10%小牛血清的磷酸盐缓冲液,pH为7.4;
所述样品及检测抗体稀释液为含体积分数为1%小牛血清的磷酸盐缓冲液,pH为7.4;
所述ELISA酶标板洗涤液为含体积分数为0.1%Tween-20的磷酸盐缓冲液,pH为7.4;
所述底物液为TMB;
所述终止液为摩尔浓度为2M的浓硫酸溶液。
5.如权利要求1所述的基于单克隆抗体检测人PGRN的双夹心ELISA试剂盒,其特征在于,所述人PGRN标准蛋白通过真核蛋白纯化的方法获得;所述Avidin与HRP的交联蛋白是采用过碘酸钠法将纯化的Avidin与HRP蛋白交联。
6.如权利要求5所述的基于单克隆抗体检测人PGRN的双夹心ELISA试剂盒,其特征在于:所述的过碘酸钠方法是将HRP与过碘酸钠(NaIO4)反应,获得活化的HRP;
所述的Avidin与活化的HRP反应,获得Avidin与HRP的交联蛋白。
7.权利要求1至6其中之一所述的基于单克隆抗体检测人PGRN的双夹心ELISA试剂盒用于乳腺癌、肺癌及Ⅱ型糖尿病病人的血清学检测应用。
8.如权利要求7所述的应用,其特征在于,所述乳腺癌,肺癌及Ⅱ型糖尿病病人的血清学检测是检测重组的PGRN蛋白以及天然的人PGRN蛋白。
9.如权利要求8所述的应用,其特征在于,检测重组的PGRN蛋白以及天然的人PGRN蛋白具体包括以下步骤:(1)包被ELISA酶标板:用包被缓冲液将包被抗体4F10稀释成10μg/mL,100μL/孔,4℃过夜;
(2)封闭:甩去孔中液体,加入200μL/孔的ELISA酶标板洗涤液,洗涤3-5次后,加入200μL/孔的封闭液,37℃、2h后,洗涤3-5次,并甩干;
(3)加待检测样品:向所述酶标板中加入待检测样品,100μL/孔,37℃、1h后,洗涤3-5次,并甩干;
(4)加检测抗体:向所述酶标板中加入5B7-biotin,100μL/孔,37℃、1h后,洗涤3-5次,并甩干;
(5)加Avidin与HRP的交联蛋白:向所述酶标板中加入Avidin与HRP的交联蛋白,100μL/孔,37℃、1h后,洗涤5-6次,并甩干;
(6)显色:向所述酶标板中加入底物液,100μL/孔,37℃、3-5min后加终止液。
(7)终止:向所述酶标板中加入终止液,50μL/孔,反应后,酶标仪450nm处读数。