1.一种检测食品中雌二醇的方法,包括如下步骤:(1)雌二醇标准曲线的绘制:包括步骤(1‑a)、(1‑b)、(1‑c)、(1‑d)和(1‑e),(1‑a)识别探针溶液A的制备:将适配体溶液与发夹链溶液在磷酸二氢钠缓冲溶液中混合,所述适配体溶液的浓度为5~50μM,发夹链溶液的浓度为1~5μM,磷酸二氢钠溶液的浓度为0.01~1M,反应制备得到识别探针溶液A,反应温度为15~45℃,反应时间为5~45分钟;所述适配体,其序列为TGGGCCCTTTACGGACCGCGTGATGGTT;所述发夹链,其序列为AACCATCACGCGGTCCGTAACGATGGACTCGGCATCGAGTCCATCGTTAC,且发夹链的3’端被封闭;
(1‑b)8组雌二醇标准品溶液的制备:雌二醇标准品溶解于浓度为1%~10%甲醇溶液和浓度为0.01~1μM的磷酸二氢钠缓冲溶液的混合溶液中得到雌二醇标准品溶液,甲醇溶液与磷酸二氢钠缓冲溶液添加量的体积比为1∶10,8组雌二醇标准品溶液中,雌二醇的浓度‑1 ‑1 ‑1 ‑1 ‑1 ‑1
分别为0.005ng mL 、0.05ng mL 、0.25ng mL 、0.5ng mL 、2.5ng mL 、5ng mL 、25ng ‑1 ‑1
mL 和50ng mL ;
(1‑c)8组标准品孵育溶液B的制备:在识别探针溶液A中,加入exonuclease I酶溶液、exonuclease I酶缓冲溶液和步骤(1‑b)中制备得到的8组雌二醇标准品溶液,分别进行孵育得到8组标准品孵育溶液B,其中,识别探针溶液A的添加量为10~30μL,exonuclease I酶‑1
溶液的添加量为1~10μL,exonuclease I酶溶液的浓度为1~10UμL ,exonuclease I酶缓冲溶液的添加量为1~10μL,8组雌二醇标准品溶液的添加量为5~50μL,孵育时间10min~
120min,孵育温度10~60℃;
(1‑d)用微流控芯片仪分别测定上述8组标准品孵育溶液B中识别探针和发夹链的浓度,得到发夹链和识别探针的浓度比值;
(1‑e)根据8组标准品孵育溶液B中雌二醇的浓度和对应的发夹链和识别探针的浓度比值,绘制标准曲线;
(2)待测样品溶液C的制备:取10~100ml食品样品溶液,去除脂肪,加入2~4ml硝普钠溶液和1~10ml硫酸锌溶液,充分混合,离心得到待测样品溶液C,其中硝普钠溶液的浓度为
0.1~10M,硫酸锌溶液的浓度为0.1~10M;
(3)待测样品孵育溶液D的制备:在步骤(1‑a)得到的识别探针溶液A中,加入exonuclease I酶溶液、exonuclease I酶缓冲溶液和步骤(2)中制备得到的待测样品溶液C,进行孵育得到待测样品孵育溶液D,其中,识别探针溶液A的添加量为10~30μL,‑1
exonuclease I酶溶液的添加量为1~10μL,exonuclease I酶溶液的浓度为1~10U μL ,exonuclease I酶缓冲溶液为1~10μL,待测样品溶液C的的添加量为5~50μL,孵育时间为
10min~120min,孵育温度为10~60℃;
(4)用微流控芯片仪分别测定上述待测样品孵育溶液D中识别探针和发夹链的浓度,得到发夹链和识别探针的浓度比值;
(5)将步骤(4)所得发夹链和识别探针的浓度比值与步骤(1)所得的雌二醇标准曲线对比,得到待测样品溶液C中雌二醇的浓度。
2.权利要求1所述的检测食品中雌二醇的方法,其中,步骤(1‑d)和步骤4中的微流控芯片仪为MCE‑202 MultiNA微芯片电泳系统。