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专利号: 2018100606096
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种果聚糖蔗糖酶的突变体酶,其特征在于,是将来源于Brenneria sp.EniD312的果聚糖蔗糖酶的第404位的谷氨酸Glu替换成色氨酸Trp,所述突变体酶的氨基酸序列如SEQ ID No:4所示。

2.根据权利要求1所述的一种果聚糖蔗糖酶的突变体酶,其特征在于,编码所述果聚糖蔗糖酶的突变体酶的基因序列如SEQ ID No:3所示。

3.编码权利要求1或2所述突变体酶的基因。

4.携带权利要求3所述基因的质粒。

5.携带权利要求3所述基因的微生物细胞。

6.一种表达权利要求1或2所述突变体酶的重组大肠杆菌,其特征在于,以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主,转化重组表达质粒pET-22b(+)-E404W。

7.权利要求1或2所述突变体酶的制备方法,其特征在于,其具体步骤为:(1)在Brenneria sp.EniD312的果聚糖蔗糖酶模拟结构的基础上确定突变位点;

(2)以重组质粒pET-22b(+)-Brsp-LS为模板,设计正向和反向引物,使用两步法对Brenneria sp.EniD312的果聚糖蔗糖酶进行定点突变,所述重组质粒pET-22b(+)-Brsp-LS的制备方法为:合成SEQ ID No:1所示的果聚糖蔗糖酶levan酶的基因片段BN1221_00994c,并连接至pET-22b(+)的酶切位点Nde I和Xho I之间,获得重组质粒pET-22b(+)-Brsp-LS;

(3)将构建成功的突变体质粒导入表达宿主E.coliBL21(DE3),挑选验证后的阳性单克隆进行诱导表达培养;

(4)离心菌体,重悬后超声破碎,镍离子亲和层析纯化得到突变体酶E404W。

8.权利要求1或2所述突变体酶在制备果聚糖、葡萄糖或果糖中的应用。

9.权利要求4所述质粒在制备果聚糖、葡萄糖或果糖中的应用。

10.权利要求5所述微生物细胞在制备果聚糖、葡萄糖或果糖中的应用。

11.权利要求1或2所述突变体酶在化学、食品和制药领域中的应用。

12.权利要求6所述重组大肠杆菌在制备果聚糖、葡萄糖或果糖中的应用。