1.一种检测过氧亚硝酸根的双光子荧光探针,其特征在于:其结构式为:
2.权利要求1所述双光子荧光探针的制备方法,其特征在于:包括如下步骤:反应方程式为:
1)将化合物TPNIR-NH2溶于惰性溶剂中,并向其中加入三乙胺,搅拌均匀后,得混合液;
2)将化合物1的二氯甲烷溶液逐滴滴加到步骤1)的混合液中,反应设定时间后,即得。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于:步骤1)中,所述惰性溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃或二氧六环,进一步优选为无水二氯甲烷。
4.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于:化合物TPNIR-NH2、化合物1和三乙胺的物质的量之比为1:2-10:2-5。
5.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于:步骤2)中还包括将反应产物溶液进行旋干、提纯的步骤;
优选的,步骤2)中,采用硅胶柱层析对反应产物进行提纯;
优选的,所述硅胶柱层析的洗脱剂为二氯甲烷和甲醇的混合液,二氯甲烷和甲醇的体积比为150-250:1;优选为200:1。
6.权利要求1所述双光子荧光探针在活细胞和组织成像中的应用;尤其在蒽环类抗生素诱导的心肌细胞和心肌组织损伤中ONOO-的成像中的应用。
7.权利要求1所述的双光子荧光探针在心肌细胞中的成像方法,其特征在于:包括如下步骤:将培养好的心肌细胞用刺激剂刺激后再用TPNIR-FP的二甲亚砜溶液孵育,孵育设定时间后,除掉TPNIR-FP的二甲亚砜溶液,并用PBS清洗,然后进行激光共聚焦成像。
8.根据权利要求7所述的成像方法,其特征在于:所述刺激剂为阿霉素和表阿霉素。
9.根据权利要求7所述的成像方法,其特征在于:孵育的时间为20-40min。
10.权利要求1所述的双光子荧光探针在小鼠心肌组织中的成像方法,其特征在于:包括如下步骤:在小鼠腹腔注射设定浓度的药物,然后在小鼠的尾静脉注射探针溶液,一定时间后,将小鼠麻醉后摘除心脏,取左心室组织切片用于双光子荧光成像。