1.一种表达D-阿洛酮糖3-差向异构酶的重组菌,其特征在于,所述重组菌以枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis(CCTCC M2016536)为宿主,表达来源于解纤维梭菌的D-阿洛酮糖
3-差向异构酶。
2.根据权利要求1所述重组菌,其特征在于,所述编码D-阿洛酮糖3-差向异构酶基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根据权利要求1或2所述重组菌,其特征在于,所述重组菌的构建方法为:将核苷酸序列为SEQ ID NO.1的D-阿洛酮糖3-差向异构酶基因连接到表达载体pHY300PLK上,构建重组质粒pHY300PLK-DPEase,将重组质粒pHY300PLK-DPEase转入枯草芽孢杆菌后得到重组菌。
4.应用权利要求1-3任一所述重组菌生产D-阿洛酮糖3-差向异构酶的方法,其特征在于,所述方法具体步骤如下:将重组菌接种于LB液体培养基中,于35-38℃、150-250rpm培养
8-10h,然后以3-6%的接种量接种至TB培养基中,于30-33℃、150-200rpm培养40-52h;将获得的发酵液稀释至OD600为4-5后,超声破壁离心后即获得破壁上清粗酶液。
5.一种固定化细胞方法,其特征在于,具体步骤如下:
1)培养权利要求1-3所述的重组菌得到发酵液,将发酵液离心后用缓冲液复溶,添加硅藻土;
2)将步骤1)所得的菌悬液与海藻酸钠溶液均匀混合,调节细胞终浓度;
3)将步骤2)所得的混合液用针式注射器以40-60滴/min的速度滴入的CaCl2中成型,4-6℃静置硬化2-3h。
6.根据权利要求5所述固定化细胞方法,其特征在于,所述步骤1)中硅藻土的添加量按质量分数为0.5%-3%。
7.根据权利要求5或6所述固定化细胞方法,其特征在于,所述步骤2)中海藻酸钠的添加量按质量分数为0.5%-4%,调节细胞终浓度为10g/L-200g/L。
8.根据权利要求5所述固定化细胞方法,其特征在于,所述步骤3)中CaCl2的添加量按质量分数为0.5%-8%。
9.根据权利要求5-8任一所述固定化细胞方法得到的固定化细胞。
10.权利要求9所述的固定化细胞在制备D-阿洛酮糖上的应用。