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专利号: 2018101631790
申请人: 巢湖学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种革兰氏染色质控片的制作方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)准备载玻片(4)并在载玻片(4)的一端为标记区(1),用于记录待检测样品菌种的信息;

(2)在载玻片(4)上设置质控菌区(2)和样品菌区(3),且质控菌区(2)和样品菌区(3)及标记区(1)互不重叠;

(3)准备防水胶布(5)和双面防水胶片(6),并将防水胶布(5)和双面防水胶片(6)黏合在一起后;接着将防水胶布(5)和双面防水胶片(6)进行贯通打孔,再将防水胶布(5)的一面贴合在质控菌区(2)上并形成凸起边缘;质控菌区(2)经紫外照射处理后,最后将防水贴纸(7)跟双面防水胶片(6)的一面贴合;制得保护罩;

(4)将大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别进行培养;经培养后的大肠杆菌菌液和金黄色葡萄球菌菌液进行混合,制得质控菌液;随后将质控菌液加入保护罩的双面防水胶片(6)上的孔内,制得待处理的革兰氏染色质控片;

(5)将步骤(4)制得的所述待处理的革兰氏染色质控片进行干燥处理,随后将所述待处理的革兰氏染色质控片中与所述质控菌区(2)相对的背面在酒精灯火焰上方通过2-3次进行固定,然后将质控菌区(2)的双面防水胶片(6)上的孔置于260nm波长的紫外灯正下方

25cm-30cm处,紫外照射15min-25min,照射处理后准备防水贴纸(7),并将防水贴纸(7)贴合在双面防水胶片(6)的另一面。

2.根据权利要求1所述一种革兰氏染色质控片的制作方法,其特征在于:所述大肠杆菌为大肠杆菌菌株CCTCC AB 93154;所述金黄色葡萄球菌为金黄色葡萄球菌菌株CCTCC AB 

91093。

3.根据权利要求1或2所述一种革兰氏染色质控片的制作方法,其特征在于:所述大肠杆菌菌液为将大肠杆菌培养后OD值控制在0.2-0.8的培养液;所述金黄色葡萄球菌菌液为将金黄色葡萄球菌培养后OD值控制在0.2-0.8的培养液。

4.根据权利要求3所述一种革兰氏染色质控片的制作方法,其特征在于:所述质控菌液为所述大肠杆菌菌液与所述金黄色葡萄球菌菌液按照体积比为5:3进行混合制得的。

5.根据权利要求1所述一种革兰氏染色质控片的制作方法,其特征在于:所述干燥温度控制在35℃-45℃,所述干燥处理采用电热鼓风干燥箱。

6.根据权利要求4所述一种革兰氏染色质控片的制作方法,其特征在于:所述干燥温度控制在40℃,所述紫外照射处理时间为20min。

7.根据权利要求1所述一种革兰氏染色质控片的制作方法,其特征在于:步骤(3)中所述打孔的孔径尺寸为5mm-6mm;所述双面防水胶片(6)的厚度尺寸为3mm-6mm。

8.一种革兰氏染色质控片,其特征在于:采用权利要求1所述一种革兰氏染色质控片的制作方法进行制作而成。

9.一种革兰氏染色质控片的应用,其特征在于:包括以下步骤:

(1)将培养后的待测样品菌进行移取,制得样品菌液;

(2)选用权利要求8中所述一种革兰氏染色质控片,在标记区(1)将样品菌的信息进行登记;

(3)将样品菌液滴加至样品菌区(3),然后将样品菌液进行涂片、干燥和固定的处理,接着将革兰氏染色质控片的保护罩沿着凸起边缘撕去;将革兰氏染色质控片中质控菌区(2)和样品菌区(3)同时进行革兰氏染色操作;

(4)革兰氏染色操作后进行镜检,首先观察质控菌的染色区域,若看到红色杆菌与紫色球菌或蓝紫色球菌,说明染色过程正确,再观察样品菌的染色区域,紫色或蓝紫色表示样品菌为革兰氏阳性菌,红色表示样品菌为革兰氏阴性菌;若观察质控菌的染色区域,未看到红色杆菌与紫色球菌或蓝紫色球菌,说明染色过程失败,需要重新进行染色或更换合适革兰氏染色试剂。

10.根据权利要求9所述一种革兰氏染色质控片的应用,其特征在于:步骤(1)中所述移取方式为采用接种环进行操作。