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专利号: 2018102187186
申请人: 华侨大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种检测食品中卡那霉素残留量的试剂盒,包括试纸条和缓冲液,其特征在于:所述试纸条包括底板和底板上依次连接的样品垫、反应膜和吸水垫;所述反应膜上设有以卡那霉素特异性适配体DNA修饰的检测线和控制线,所述检测线设置于控制线与样品垫之间,所述特异性适配体DNA序列如SEQ ID NO 01所示;所述样品垫上修饰有荧光标记DNA,其序列如SEQ ID NO 01所示,所述荧光标记DNA在5’端修饰有荧光基团;

所述缓冲液包括缓冲液A和缓冲液B;

所述缓冲液A为pH=4.1~5.0的10mM磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液;

所述缓冲液B为0.8~1.2mM EDTA、0.8~1.2M NaCl和质量浓度0.05%~0.1%Tween-

20的8~12mM PBS缓冲液,所述缓冲液B的pH 7.2~7.6;所述PBS组成为氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠。

2.根据权利要求1所述的一种检测食品中卡那霉素残留量的试剂盒,其特征在于:所述荧光标记DNA浓度为8~12μM,体积为8~12μL。

3.根据权利要求1所述的一种检测食品中卡那霉素残留量的试剂盒,其特征在于:所述特异性适配体DNA为以卡那霉素为模板合成的DNA片段,所述DNA片段溶液浓度为75~85μM,体积为0.4~0.8μL。

4.根据权利要求1所述的一种检测食品中卡那霉素残留量的试剂盒,其特征在于:所述检测线和控制线为与试纸条长边相垂直的条带状,所述控制线设置于靠近吸水垫的一侧,所述检测线设置于控制线与样品垫之间,所述检测线与控制线间距0.3~0.5cm。

5.一种食品中卡那霉素残留量的检测方法,采用所述权利要求1~4任一项所述的试剂盒,其特征在于,包括如下步骤:(1)样品预处理:将液体食品样品离心处理后,用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液溶液稀释上清液10~20倍,得到待检样品液;

(2)加样:将试纸条的样品垫与待检样品液接触,平放试剂盒,使待待检样品液由样品垫端向吸水垫端流动,静止3~5分钟;

(3)荧光检测:将试纸条进行荧光检测,检测时的激发波长为490~495nm,发射波长为

515~520nm;

(4)分析:检测结果包括阳性、阴性和无效,检验人员依据检测结果可判定卡那霉素残留量是否超标;

①阳性:当检测线显示出绿色条带,而控制线显色,判为阳性,用“+”表示;

②阴性:当检测线显示出绿色条带,而控制线不显色,判为阴性,用“-”表示;

③无效:当检测线不显示出绿色条带,则无论控制线是否显示出绿色条带,试纸均失效。

6.根据权利要求5所述的一种食品中卡那霉素残留量的检测方法,其特征在于:所述步骤(2)将试纸条插入待检样品液中,控制插入部分在样品垫的1/3。

7.根据权利要求5所述的一种食品中卡那霉素残留量的检测方法,其特征在于:所述步骤(2)取100~200μL待检样品液滴加于试纸条的样品垫顶端。

8.根据权利要求5所述的一种食品中卡那霉素残留量的检测方法,其特征在于:所述步骤(1)~(4)前包括步骤(0):试剂盒的制备:①试纸条的制备:取底板一块,在底板上依次黏贴样品垫、反应膜、吸水垫,样品垫的末端与反应膜相连,反应膜的末端与吸水垫相连,样品垫的始端与底板的始端对齐,吸水垫的末端与底板的末端对齐;所述反应膜上设有以卡那霉素特异性适配体DNA修饰的检测线和控制线,所述检测线设置于控制线与样品垫之间,所述特异性适配体DNA序列如SEQ ID NO 

01所示;所述样品垫上修饰有荧光标记DNA,其序列如SEQ ID NO 01所示;所述检测线和控制线为与试纸条长边相垂直的条带状,所述控制线设置于靠近吸水垫的一侧,所述检测线设置于控制线与样品垫之间,所述检测线与控制线间距0.3~0.5cm;

②缓冲液的配制:所述缓冲液包括缓冲液A和缓冲液B;

所述缓冲液A为pH=4.1~5.0的10mM磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液;

所述缓冲液B为0.8~1.2mM EDTA、0.8~1.2M NaCl和质量浓度0.05%~0.1%Tween-

20的8~12mM PBS缓冲液,所述缓冲液B的pH 7.2~7.6;所述PBS组成为氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠。

9.根据权利要求8所述的一种食品中卡那霉素残留量的检测方法,其特征在于:所述反应膜为硝酸纤维素膜;所述反应膜上荧光标记DNA浓度为8~12μM,体积为8~12μL;所述特异性适配体DNA为以卡那霉素为模板合成的DNA片段,所述DNA片段溶液浓度为75~85μM,体积为0.4~0.8μL。