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专利号: 201810219464X
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种分泌阿昔洛韦单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其特征在于,所述杂交瘤细胞株于

2017年9月5号保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏编号为:CGMCC No.14695。

2.如权利要求1所述的一种分泌阿昔洛韦单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法,其特征在于,包含如下步骤:步骤一:以阿昔洛韦为起始反应物,通过戊二醛法与蛋白载体相连,之后通过透析分离完全抗原和未偶联的小分子半抗原,完全抗原通过紫外吸收扫描方法鉴定;

步骤二:将免疫原与佐剂乳化完全后,通过背部皮下注射多次免疫BALB/c小鼠,首次免疫采用弗氏完全佐剂乳化;加强免疫采用弗氏不完全佐剂乳化免疫原;

步骤三:将经过上述免疫过程的小鼠进行采血,通过间接ELISA检测小鼠血清中抗阿昔洛韦抗体的效价和特异性,筛选出能产生抗阿昔洛韦抗体的小鼠;

步骤四:将筛选出的小鼠用弗氏不完全佐剂再进行加强免疫,然后通过腹腔注射进行冲击免疫,冲击免疫采用阿昔洛韦完全抗原与生理盐水混合均匀后进行;

步骤五:通过聚乙二醇(PEG2000)法将进行冲击免疫后的BALB/c小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞融合,将融合的细胞通过HAT培养基培养,利用间接ELISA筛选能产生抗阿昔洛韦抗体的杂交瘤细胞(阳性细胞),并进一步利用间接竞争ELISA法测定阳性细胞孔上清对阿昔洛韦的抑制效果,通过有限稀释法将对阿昔洛韦有最好抑制效果的阳性细胞孔进行三次亚克隆,最终筛选出获得能分泌阿昔洛韦单克隆抗体的杂交瘤细胞株;

步骤六:取8-10周龄BALB/c小鼠,每只小鼠腹腔注射石蜡油1mL,7天后每只小鼠腹腔注射1×106杂交瘤细胞,从第7天开始收集腹水,将腹水通过辛酸-硫酸铵法纯化,获得的单抗置于-20℃保存。

步骤七:将获得的单克隆抗体通过小鼠单抗Ig类/亚类鉴定用酶标二抗套装测定其抗体亚型及亚类,通过ELISA法测定其分泌的抗体的灵敏度和特异性。

3.如权利要求2所述的一种分泌阿昔洛韦单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法,其特征在于,所述步骤一为取4mg阿昔洛韦,再加入30μL5%的戊二醛水溶液,室温搅拌,活化

10min,另取10mgBSA(牛血清白蛋白)溶解于2mL、0.05M、pH9.6的CB(碳酸盐缓冲溶液)溶液中,将上述活化液逐滴加入KLH溶液中,室温搅拌反应1.5小时,4℃透析三天,-20℃分装保存获得阿昔洛韦完全抗原。

4.如权利要求3所述的一种分泌阿昔洛韦单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法,其特征在于,所述步骤二、步骤四中,每次免疫之间间隔三周,首次免疫剂量为100μg/只,加强免疫剂量为50μg/只,冲击免疫时免疫剂量为加强免疫剂量的一半。

5.如权利要求2-4任一所述的一种分泌阿昔洛韦单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法,其特征在于,所述步骤三中,采血为第3次免疫过程结束后第7天进行采血,所述步骤四中,再进行2次加强免疫后进行冲击免疫。

6.如权利要求2-5任一所述的一种分泌阿昔洛韦单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法,其特征在于,所述步骤五中,细胞融合是在冲击免疫结束3天后进行。

7.如权利要求1所述的一种分泌阿昔洛韦单克隆抗体的杂交瘤细胞株的应用,其特征在于,所述杂交瘤细胞可用于制备阿昔洛韦单克隆抗体。

8.一种阿昔洛韦单克隆抗体,其特征在于,所述抗体是从保藏编号为:CGMCC No.14695的杂交瘤细胞株获得的。

9.如权利要求8所述的一种阿昔洛韦单克隆抗体的应用,其特征在于,所述阿昔洛韦单克隆抗体可用于特异性识别阿昔洛韦。

10.应用权利要求1所述分泌阿昔洛韦单克隆抗体的杂交瘤细胞株的产物或权利要求8所述阿昔洛韦单克隆抗体制备得到的检测试剂盒。