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专利号: 2018102245228
申请人: 安徽师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-12-08
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于DNA‑银纳米簇构建电致化学发光传感器的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括以下步骤:

(1)、将2.5OD的DNAS1、DNA HP1、DNA HP2和miRNA‑21序列分别溶解在缓冲溶液中,得到DNA S1缓冲溶液、DNA HP1缓冲溶液、DNA HP2缓冲溶液和miRNA‑21缓冲溶液;

(2)、将抛光处理后的玻碳电极浸入氯金酸溶液中,进行电沉积,取出,清洗,得到修饰了金纳米粒子的玻碳电极;

(3)、将步骤(2)得到的修饰了金纳米粒子的玻碳电极浸入到DNAS1的缓冲溶液中,培养,然后取出,清洗,得到修饰了单链DNAS1的玻碳电极;

(4)、将步骤(3)得到的修饰了单链DNAS1的玻碳电极浸入6‑巯基‑1‑己醇溶液中,培养,清洗;

(5)、将miRNA‑21缓冲溶液和DNA HP1、DNA HP2缓冲溶液混合,杂交,制备成DNA HP1‑HP2溶液;

(6)将步骤(4)中得到的修饰了6‑巯基‑1‑己醇/DNAS1玻碳电极浸入步骤(5)中得到的DNA HP1‑HP2溶液,培养,然后取出,清洗,得到修饰了DNA HP1‑HP2的玻碳电极;

(7)将步骤(6)得到的修饰了DNA HP1‑HP2的玻碳电极浸入硝酸银溶液中,培养,再将电极浸入硼氢化钠溶液中,培养,然后取出,清洗,即得;

步骤(1)中DNAS1序列为:5'‑SH‑GGTTGCTATATCG‑3’;

DNA HP1序列为:

5'‑CCCCCCCCCCCCTCAACATCAGTCTGATAAGCTACCGTCTTGAGCTAGCTTATCAGACTGCGATATAGCAACC‑3;

DNA HP2序列为:5'‑TAAGCTAGCTCAAGACGGTAGCTTATCAGACTGCCGTCTTGAGCCCCCCCCCCCCC;

miRNA‑21序列为:5'‑UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA‑3’;

步骤(6)中所述培养,具体是:在37℃下培养1.5‑2h。

2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(3)具体为:将修饰了金纳米粒子的玻碳电极浸入5μM的DNAS1的缓冲溶液中培养10‑12h后取出,用磷酸盐缓冲溶液清洗。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法,其特征在于,步骤(4)中所述培养,具体是在37℃‑40℃下培养1‑1.5h。

4.根据权利要求1或2所述的制备方法,其特征在于,步骤(7)具体是:将修饰了DNA HP1‑HP2的玻碳电极浸入120μL 30μM硝酸银溶液中,在4℃下避光培养0.5‑1h,再浸入120μL 

30μM硼氢化钠溶液中,4℃下避光培养2‑2.5小时,利用硼氢化钠的还原性合成以DNA为模板的银纳米簇,然后取出,清洗,即得。

5.一种权利要求1‑4任一项所述制备方法制备的基于DNA‑银纳米簇构建电致化学发光传感器。

6.一种权利要求5所述基于DNA‑银纳米簇构建电致化学发光传感器检测miRNAs的应用。

7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,所述检测方法为:a、将2.5OD的DNAS1、DNA HP1、DNA HP2和miRNA‑21序列分别溶解在缓冲溶液中,得到DNA S1缓冲溶液、DNA HP1缓冲溶液、DNA HP2缓冲溶液和miRNA‑21缓冲溶液;

b、将抛光处理后的玻碳电极浸入氯金酸溶液中,进行电沉积,取出,清洗,得到修饰了金纳米粒子的玻碳电极;

c、将步骤b得到的修饰了金纳米粒子的玻碳电极浸入到DNAS1的缓冲溶液中,培养,然后取出,清洗,得到修饰了单链DNAS1的玻碳电极;

d、将步骤c得到的修饰了单链DNAS1的玻碳电极浸入6‑巯基‑1‑己醇溶液中,培养,清洗;

e、将不同浓度的miRNA‑21缓冲溶液和DNA HP1、DNA HP2缓冲溶液混合,杂交,制备成不同浓度的DNA HP1‑HP2溶液;

f、将步骤d得到的修饰了6‑巯基‑1‑己醇/DNAS1玻碳电极浸入步骤e中得到的不同浓度的DNA HP1‑HP2溶液,培养,然后取出,清洗,得到修饰了DNA HP1‑HP2的玻碳电极;

g、将步骤f得到的修饰了DNA HP1‑HP2的玻碳电极浸入硝酸银溶液中,培养,再将电极浸入硼氢化钠溶液中,培养,然后取出,清洗,即得;

h、将步骤g获得银纳米簇的玻碳电极浸入含有过硫酸钾的0.1M PBS磷酸盐缓冲液中,用电致化学发光方法进行检测;根据不同浓度的miRNA‑21制备的银纳米簇对应的发光强度,构建信号强度与miRNA‑21浓度的线性关系,实现对miRNA‑21的检测。

8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,步骤e中所述miRNA‑21缓冲溶液浓度分别‑3 ‑2 ‑1 2 3 4

为10 ,10 ,10 ,1,10,10 ,10和10fM。