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专利号: 2018102245228
申请人: 安徽师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-12-08
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于DNA-银纳米簇构建电致化学发光传感器的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括以下步骤:(1)、将2.5OD的DNAS1、DNA HP1、DNA HP2和miRNA-21序列分别溶解在缓冲溶液中,得到DNA S1缓冲溶液、DNA HP1缓冲溶液、DNA HP2缓冲溶液和miRNA-21缓冲溶液;

(2)、将抛光处理后的玻碳电极浸入氯金酸溶液中,进行电沉积,取出,清洗,得到修饰了金纳米粒子的玻碳电极;

(3)、将步骤(2)得到的修饰了金纳米粒子的玻碳电极浸入到DNAS1的缓冲溶液中,培养,然后取出,清洗,得到修饰了单链DNAS1的玻碳电极;

(4)、将步骤(3)得到的修饰了单链DNAS1的玻碳电极浸入6-巯基-1-己醇溶液中,培养,清洗;

(5)、将miRNA-21缓冲溶液和DNA HP1、DNA HP2缓冲溶液混合,杂交,制备成DNA HP1-HP2溶液;

(6)将步骤(4)中得到的修饰了6-巯基-1-己醇/DNAS1玻碳电极浸入步骤(5)中得到的DNA HP1-HP2溶液,培养,然后取出,清洗,得到修饰了DNA HP1-HP2的玻碳电极;

(7)将步骤(6)得到的修饰了DNA HP1-HP2的玻碳电极浸入硝酸银溶液中,培养,再将电极浸入硼氢化钠溶液中,培养,然后取出,清洗,即得。

2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)中DNAS1序列为:5'-SH-GGTTGCTATATCG-3’;

DNA HP1序列为:

5'-CCCCCCCCCCCCTCAACATCAGTCTGATAAGCTACCGTCTTGAGCTAGCTTATCAGACTGCGATATAGCAACC-3;

DNA HP2序列为:5'-TAAGCTAGCTCAAGACGGTAGCTTATCAGACTGCCGTCTTGAGCCCCCCCCCCCCC;

miRNA-21序列为:5'-UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA-3’。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法,其特征在于,步骤(3)具体为:将修饰了金纳米粒子的玻碳电极浸入5μM的DNAS1的缓冲溶液中培养10-12h后取出,用磷酸盐缓冲溶液清洗。

4.根据权利要求1-3任一项所述的制备方法,其特征在于,步骤(4)中所述培养,具体是在37℃-40℃下培养1-1.5h。

5.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法,其特征在于,步骤(6)中所述培养,具体是:在37℃下培养1.5-2h。

6.根据权利要求1-5任一项所述的制备方法,其特征在于,步骤(7)具体是:将修饰了DNA HP1-HP2的玻碳电极浸入120μL 30μM硝酸银溶液中,在4℃下避光培养0.5-1h,再浸入

120μL 30μM硼氢化钠溶液中,4℃下避光培养2-2.5小时,利用硼氢化钠的还原性合成以DNA为模板的银纳米簇,然后取出,清洗,即得。

7.一种权利要求1-6任一项做制备的基于DNA-银纳米簇构建电致化学发光传感器。

8.一种权利要求7所述基于DNA-银纳米簇构建电致化学发光传感器检测miRNAs的应用。

9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述检测方法为:

a、将2.5OD的DNAS1、DNA HP1、DNA HP2和miRNA-21序列分别溶解在缓冲溶液中,得到DNA S1缓冲溶液、DNA HP1缓冲溶液、DNA HP2缓冲溶液和miRNA-21缓冲溶液;

b、将抛光处理后的玻碳电极浸入氯金酸溶液中,进行电沉积,取出,清洗,得到修饰了金纳米粒子的玻碳电极;

c、将步骤b得到的修饰了金纳米粒子的玻碳电极浸入到DNAS1的缓冲溶液中,培养,然后取出,清洗,得到修饰了单链DNAS1的玻碳电极;

d、将步骤c得到的修饰了单链DNAS1的玻碳电极浸入6-巯基-1-己醇溶液中,培养,清洗;

e、将不同浓度的miRNA-21缓冲溶液和DNA HP1、DNA HP2缓冲溶液混合,杂交,制备成不同浓度的DNA HP1-HP2溶液;

f、将步骤d得到的修饰了6-巯基-1-己醇/DNAS1玻碳电极浸入步骤e中得到的不同浓度的DNA HP1-HP2溶液,培养,然后取出,清洗,得到修饰了DNA HP1-HP2的玻碳电极;

g、将步骤f得到的修饰了DNA HP1-HP2的玻碳电极浸入硝酸银溶液中,培养,再将电极浸入硼氢化钠溶液中,培养,然后取出,清洗,即得;

h、将步骤g获得银纳米簇的玻碳电极浸入含有过硫酸钾的磷酸盐缓冲液PBS(0.1M)中,用电致化学发光方法进行检测;根据不同浓度的miRNA-21制备的银纳米簇对应的发光强度,构建信号强度与miRNA-21浓度的线性关系,实现对miRNA-21的检测。

10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,步骤e中所述miRNA-21缓冲溶液浓度分别为10-3,10-2,10-1,1,10,102,103和104fM。