1.一种分析柞蚕茧中蛋白质组的方法，其特征在于：

采取如下步骤：

1)取样：取3个质量相同的同批柞蚕茧，剥去茧衣，分别编号为a、b、c；

2)分层：将a、b、c置于去离子水中加热，将茧壳分为外层、中层、内层和蛹衬，分别记为a1、a2、a3、a4，b1、b2、b3、b4，c1、c2、c3、c4；将分层的茧层放入60℃烘箱干燥；

3)溶解：称取同一质量的不同茧层，剪碎，置于0.5wt％Na2CO3溶液中，调节pH11～12，

130℃下水热反应4～6h，冷却后，离心除去未完全溶解部分，得到蚕丝蛋白溶液的粗产物；

4)纯化：将蚕丝蛋白溶液在4℃条件下蚕丝蛋白溶液的粗产物经过截留分子量为1000的膜透析24h，得到蚕丝蛋白溶液；

5)冷冻干燥：将蚕丝蛋白溶液在-30～-10℃的低温中冷冻，经真空冷冻干燥后得到蚕丝蛋白粉末；

6)SDS-PAGE凝胶电泳：蚕丝蛋白粉末溶于CB 9.6缓冲液中，得到20μg/μL的溶解液；取5～10μL溶解液，加入等体积的上样缓冲液，在100℃条件下加热10min，冷却至室温后，将各样品和蛋白Marker加入10％～15％聚丙烯酰胺凝胶中，进行电泳实验，所述聚丙烯酰胺凝胶包括分离胶和浓缩胶；

7)染色：电泳结束后，剥离浓缩胶，用去离子水将分离胶冲洗干净，置于固定液中固定

25～35min；除去固定液，用去离子水清洗3～5次，每次10～20min；之后将分离胶浸入考马斯亮蓝G-250染色液中，摇床染色3～5h；

8)脱色：用去离子水清洗分离胶至条带清晰，背景透明；

9)切胶脱色：将蛋白条带从分离胶上切下，置于干净的离心管中，用去离子水清洗2～3次后，进行还原和烷基化；再加入由25mM碳酸氢铵和50％乙腈配置的脱色液，超声处理，吸去脱色液后，重复一次，最后加入50～100μL乙腈，振荡脱水，待胶条变白后，吸去全部液体，冷冻干燥；

10)胶内酶解：以1:50的浴比将胶条浸没于25mM碳酸氢铵中，加入2～10μg测序级且经过修饰的胰蛋白酶，在37℃下孵育12～16h，收集提取液后，再加入20～50μL萃取液，所述萃取液为5％甲酸溶液和乙腈按体积比1:1混合，重复提取胶条中的多肽片段；将提取液冷冻干燥后，重新溶于0.1％甲酸溶液中；

11)质谱分析：进行LC-MS/MS测试，采用蛋白质定量技术测定相对定量，将不同层的蛋白质种类和含量的数据进行综合分析，比较每层中各组分的相对含量。

2.根据权利要求1所述的一种分析柞蚕茧中蛋白质组的方法，其特征在于：所述步骤2)分层时，将柞蚕茧按1:100的浴比置于去离子水中，控制温度在95±2℃，水浴加热5～

10min。

3.根据权利要求1所述的一种分析柞蚕茧中蛋白质组的方法，其特征在于：所述步骤6)凝胶电泳中，先恒压80V，10min后调整电压为120V，待样品中的溴酚蓝指示剂位于凝胶底部时，取出凝胶。

4.根据权利要求1所述的一种分析柞蚕茧中蛋白质组的方法，其特征在于：所述步骤7)染色中，固定液的配置：40mL甲醇、10mL乙酸，加去离子水至100mL；染色液的配置：将100g硫酸铵加入100mL去离子水和100mL磷酸的混合溶液中，充分搅拌至溶解完全，加入1.2g考马斯亮蓝G-250、800mL去离子水，充分搅拌后加入200mL甲醇。

5.根据权利要求1所述的一种分析柞蚕茧中蛋白质组的方法，其特征在于：所述步骤9)还原烷基化的步骤：加入500μL乙腈，处理10min后，凝胶脱水呈现不透明，快速离心，吸去液体；加入30～50μL溶于100mM NH4HCO3的10mM二硫苏糖醇溶液，覆盖全部胶条，56℃水浴

30min，冷却至室温后，加入500μL乙腈，10min后吸去全部液体；在加入30～50μL溶于100mM NH4HCO3的55mM碘乙酰胺溶液，覆盖全部胶条，室温避光20min；加入乙腈使胶条脱水后吸去全部液体。