1.一种分析桑蚕丝形成过程及蛋白质组变化的方法，其特征在于采用步骤如下：

1)取A、B、C、D、E同批蚕卵，在相同外界条件下喂养至5龄第3天；

2)将步骤1)中A、B、C、D、E组分别在5龄第4、5、6、7、8天喂养喷洒13C标记甘氨酸的同种桑叶；

3)待步骤2)5组桑蚕的蚕熟率在90％～95％时，将熟蚕布放到平板吐丝床上，布放密度在0.5～1kg/m2；

4)分别收集步骤3)5组桑蚕0～100m、200～400m、400～700m、700～1200m的蚕丝，编号为甲、乙、丙、丁；

5)将步骤4)得到的不同组、不同长度的蚕丝用去离子水清洗3～5次，60℃干燥后，于Na2CO3溶液中水热溶解；溶液冷却后，除去未完全溶解部分，得到蚕丝蛋白溶液的粗产物；

6)将步骤5)中蚕丝蛋白溶液的粗产物经过截留分子量为1000的膜透析24h，真空冷冻干燥后得到蚕丝蛋白粉末；

7)将步骤6)得到的蚕丝蛋白粉末电泳分析：将蚕丝蛋白粉末溶于pH 9.6的碳酸盐缓冲溶液中，得到20μg/μL的溶解液；取5～10μL溶解液，经高温变性、离心制得蛋白样品，将样品的上层清液和蛋白Marker加入10～15％聚丙烯酰胺凝胶中，进行电泳实验；经考马斯亮蓝G-250染色液后，分析其分子量分布；

8)切胶脱色：将蛋白条带从分离胶上切下，置于干净的离心管中，用去离子水清洗2～3次，经还原烷基化和进一步脱色处理后，冷冻干燥；

9)胶内酶解：将胶条浸没于25mM NH4HCO3中，加入2～10μg测序级且经过修饰的胰蛋白酶，在37℃下孵育12～16h；收集提取液后，再加入30～50μL由5％甲酸溶液和乙腈按体积比

1:1混合的萃取液，重复提取胶条中的多肽片段；将提取液冷冻干燥后，重新溶于0.1％甲酸溶液中；

10)对步骤9)得到的溶液进行质谱分析：进行LC-MS测试，可得到不同组桑蚕丝的不同长度内13C同位素分布及蛋白质的表达情况。

2.根据权利要求1所述的一种分析桑蚕丝形成过程及蛋白质组变化的方法，其特征在于：所述步骤2)中13C标记甘氨酸溶液的配置：在25℃条件下，将20g 13C标记甘氨酸溶解在

100mL去离子水中，得到甘氨酸喷洒液。

3.根据权利要求1所述的一种分析桑蚕丝形成过程及蛋白质组变化的方法，其特征在于：所述步骤2)13C标记甘氨酸喷洒桑叶时，要边喷边翻，反复喷洒3～5次，2～3kg甘氨酸喷洒液喷10kg桑叶。

4.根据权利要求1所述的一种分析桑蚕丝形成过程及蛋白质组变化的方法，其特征在于：所述步骤3)中，当90～95％的蚕熟时，把熟蚕置于A1纸上，A1纸下面垫草木灰，12h内把熟蚕均匀放到平板吐丝床上；密度稀疏而均匀。

5.根据权利要求1所述的一种分析桑蚕丝形成过程及蛋白质组变化的方法，其特征在于：所述步骤3)采用上层是具有通孔的纱窗布、下层是塑料薄膜的纱窗型平板吐丝床；蚕室进行遮光处理。

6.根据权利要求1所述的一种分析桑蚕丝形成过程及蛋白质组变化的方法，其特征在于：所述步骤4)中，每4h测量平板纱的长度，记录蚕丝长度，并截取收集蚕丝。

7.根据权利要求1所述一种分析桑蚕丝形成过程及蛋白质组变化的方法，其特征是：所述步骤5)中，将蚕丝以1:50的浴比置于0.5wt％Na2CO3溶液中，调节pH 11～12，110～130℃下水热溶解3～5h。

8.根据权利要求1所述一种分析桑蚕丝形成过程及蛋白质组变化的方法，其特征是：所述步骤6)中，在4～6℃条件下进行透析。

9.根据权利要求1所述一种分析桑蚕丝形成过程及蛋白质组变化的方法，其特征是：所述步骤7)中蛋白样品的制备：取5～10μL样品溶解液于小离心管中，按体积比1:1加入上样缓冲液，在95～100℃下水浴8～10min，待冷却后在8000r/min离心2～3min，得到蛋白样品。

10.根据权利要求1所述一种分析桑蚕丝形成过程及蛋白质组变化的方法，其特征是：所述步骤7)中电泳操作时：先恒压80V，10min后调整电压为120V。