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专利号: 2018103646678
申请人: 齐鲁工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种制备阿魏酸脱羧酶的方法,其特征为,包括以下步骤:(1)将产阿魏酸脱羧酶的微生物培养,得细胞培养液,离心,制得菌体细胞,将细胞重悬于去离子水中,制得细胞质量百分比浓度为25~35wt%的溶液,破碎细胞,得细胞破碎液;

调破碎液pH值为9.0~10.0,用氯化钠调破碎液的离子强度为0.05~0.25mol/L,制得阿魏酸脱羧酶细胞破碎液;

(2)将正己烷与己醇按体积比(10~20):1混合均匀,在混合液中加入表面活性剂,使表面活性剂浓度为100~200mmol/L,制得反胶团体系溶液;将正丁醇加入到0.10~0.20mol/L的柠檬酸‑柠檬酸钠缓冲液中,使正丁醇的质量百分比浓度为5~20wt%,用氯化钠调缓冲液的离子强度为1.5~2.5mol/L,制得反萃取水相溶液;

(3)在15~30℃下,将步骤(1)制得的细胞破碎液与步骤(2)制得的反胶团体系溶液按体积比(2~15):1混合均匀,离心,取有机相,制得阿魏酸脱羧酶有机溶液;

(4)在25~35℃下,将步骤(3)制得的阿魏酸脱羧酶有机溶液与步骤(2)制得的反萃取水相溶液按体积比(2~10):1混合均匀,离心,制得阿魏酸脱羧酶水溶液;

(5)用超滤膜对步骤(4)制得的阿魏酸脱羧酶水溶液过滤,收集截留液,冷冻干燥,制得阿魏酸脱羧酶产品;

所述步骤(1)中的微生物为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)CICC21890或荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)CICC20225,以上菌株均保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC);

所述步骤(1)中的破碎细胞采用高压匀浆机,工作压力为50~55MPa、温度为5~10℃;

所述步骤(2)中的表面活性剂为阳离子型表面活性剂和非离子型表面活性剂组成的混合表面活性剂,两者的重量份配比为:阳离子型表面活性剂:非离子型表面活性剂=(2~

10):1,阳离子型表面活性剂为双十六烷基二甲基溴化铵,非离子型表面活性剂为聚氧乙烯山梨糖醇酐单硬脂酸酯;

所述步骤(3)和步骤(4)中的离心条件为4000~5000r/min、2~5min;

所述步骤(5)中的超滤膜的截留分子量为20000Dal,工作压力为0.1~0.2MPa。