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专利号: 2018104213081
申请人: 山东师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种BVDV E2抗原多表位融合肽,其特征在于,是包含BVDV-1型2个抗原表位和BVDV-

2型2个抗原表位的融合肽。

2.一种BVDV E2抗原多表位融合肽,其特征在于,N端到C端具有下述氨基酸序列之一的蛋白质:

1)序列表中SEQ ID NO.1所示氨基酸序列组成的蛋白质;

2)SEQ ID No.1所示氨基酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个氨基酸衍生的并具有与1)所述蛋白具有同等功能的蛋白质。

3.根据权利要求2所述的BVDV E2抗原多表位融合肽,其特征在于,是由4种抗原表位氨基酸序列构成:序列表中SEQ ID No.2所示的BVDV1-E2中69-79位点的序列、序列表中SEQ ID No.3所示的BVDV1-E2中304-318位点的序列、序列表中SEQ ID No.4所示的BVDV2-E2中

67-77位点的序列和序列表中SEQ ID No.5所示BVDV2-E2中302-316位点序列;

所述4种抗原表位通过柔性链串联连接组成。

4.编码权利要求1~3任一所述BVDV E2抗原多表位融合肽的基因。

5.根据权利要求4所述基因,其特征在于,是具有下述核苷酸序列之一:

1)序列表中SEQ ID NO.6所示的DNA序列;

2)与SEQ ID NO.6具有至少90%的同源性,且能够表达序列表中SEQ ID NO.5蛋白质序列的DNA序列。

6.含权利要求4或5任一所述基因的重组表达载体、宿主细胞和重组阳性菌;所述重组表达载体是基因插入到大肠杆菌表达载体pET28a(+)中得到的表达BVDV-1型和BVDV-2型E2蛋白的抗原多表位融合肽的重组表达载体;所述重组阳性菌是将含基因的重组表达载体导入大肠杆菌中,筛选得到重组阳性菌。

7.一种BVDV E2抗原多表位融合肽在BVDV表位疫苗中的应用。

8.一种BVDV E2抗原多表位融合肽间接ELISA诊断试剂盒,其特征在于,包含BVDV E2抗原多表位融合肽预包被酶标板。

优选地,所述BVDV E2抗原多表位融合肽的包被方法为:将纯化的BVDV E2多表位融合肽用包被缓冲液稀释至4μg/mL,包被酶标板,每孔加100μL,4℃过夜,用洗涤液洗涤3次,每次2min;然后加入10%马血清200μL/孔,37℃孵育2h,随后用洗涤缓冲液洗涤3次,每次

2min,真空包装后置于4℃保存备用。

9.根据权利要求8所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包含血清稀释液、酶标记结合物稀释液、阳性对照液、阴性对照液、酶标记结合物、洗涤液、底物显色液和终止液;

所述血清稀释液为含BSA和0.5‰Tween-20的磷酸盐缓冲液,血清稀释度为1:80,血清反应条件为37℃60min;

所述阴性对照液为BVDV进口试剂盒检测的阴性牛血清,所述阳性对照液为BVDV感染后的阳性牛血清;

所述酶标记结合物为辣根过氧化物酶标记的兔抗牛IgG,所述酶标记结合物稀释度为

1:5000,反应条件为37℃下反应1h;

所述洗涤液为0.5‰Tween-20的磷酸盐缓冲液;

优选地,所述底物显色液的配方为:每500mL加EDTA-2Na 0.2g、柠檬酸0.95g、甘油50mL和TMB粉末0.15g。

所述底物显色液反应条件为37℃下反应10min;

所述终止液为2mol/L的硫酸溶液。

10.权利要求8或9任一项所述试剂盒在在检测BVDV E2抗原多表位融合肽中的应用。