1.一种咔唑类荧光胺类化合物标记试剂,其特征在于:以咔唑为荧光母体环,氯甲酸酯为反应活性基团,其化学名称为:(4-(9H-咔唑-9-基)苯基)甲氧酰氯,其化学结构式为:
2.合成如权利要求1所述咔唑类荧光胺类化合物标记试剂的方法,其特征在于:(1)将咔唑与4-溴苄醇进行反应,得到中间体(4-(9H-咔唑-9-基)苯基)甲醇;(2)将中间体(4-(9H-咔唑-9-基)苯基)甲醇与固体光气反应,得到目标产物(4-(9H-咔唑-9-基)苯基)甲氧酰氯。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:步骤(1)是取代反应:将咔唑、4-溴苄醇溶解到二甲亚砜中,加入碘化亚铜、二叔戊酰甲烷和碳酸钾,油浴130℃反应24h,反应结束后,待反应液冷却至室温,抽滤,然后将抽滤液与(10-30)wt%NaCl水溶液混合析出固体,回收固体并干燥,用乙腈重结晶,得到中间体(4-(9H-咔唑-9-基)苯基)甲醇。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于:采用乙腈将步骤(1)中所得中间体(4-(9H-咔唑-9-基)苯基)甲醇重结晶3次,得到白色针状结晶产品。
5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于:步骤(1)反应中,咔唑与4-溴苄醇摩尔比为
1:1.2,碘化亚铜、二叔戊酰甲烷和碳酸钾的加入量分别为咔唑质量的25%、22%和50%。
6.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:步骤(2)是氯甲酰化反应:将固体光气溶解于二氯甲烷中,冰浴冷却条件下,滴加少量吡啶作催化剂,将溶有中间体(4-(9H-咔唑-9-基)苯基)甲醇的二氯甲烷溶液逐滴加到上述溶液中,冰浴下反应4小时,缓慢升到室温后反应5小时,反应结束后,抽滤,滤液用旋转蒸发仪减压旋干,并用正己烷重结晶,得到目标产物(4-(9H-咔唑-9-基)苯基)甲氧酰氯。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于:采用正己烷将步骤(2)中所得目标产物(4-(9H-咔唑-9-基)苯基)甲氧酰氯重结晶3次,得到白色针状结晶产品。
8.根据权利要求6所述的方法,其特征在于:步骤(2)所述酰化反应中,(4-(9H-咔唑-9-基)苯基)甲醇与固体光气的摩尔比为1:1.1,吡啶的加入量为(4-(9H-咔唑-9-基)苯基)甲醇质量的3%。
9.如权利要求1所述的咔唑类荧光胺类化合物标记试剂在检测样品中胺类化合物的含量中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用,以脂肪胺为例,其特征在于:包括以下步骤:
(1)配制pH值为9.0的硼砂/硼酸缓冲溶液;配制5份脂肪胺标准品的乙腈溶液,浓度分别为1μM、10μM、100μM、1mM、10mM;配制浓度为100mM的(4-(9H-咔唑-9-基)苯基)甲氧酰氯的乙腈溶液;
(2)依次将100μL硼砂/硼酸缓冲溶液、100μL脂肪胺标准品的乙腈溶液和50μL(4-(9H-咔唑-9-基)苯基)甲氧酰氯的乙腈溶液加到2mL的安剖瓶中,于65℃的水浴中反应15min,反应完毕后,取10μL进行高效液相色谱-荧光分析,得到脂肪胺标准品色谱分离图,将五份脂肪胺标品依次衍生、高效液相色谱-荧光分析后,以脂肪胺浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标绘制脂肪胺浓度工作曲线;
(3)将样品用(4-(9H-咔唑-9-基)苯基)甲氧酰氯标记后,进行高效液相色谱-荧光分析,将所得到的峰面积代入脂肪胺浓度工作曲线中,即可求得样品中脂肪胺的浓度。