1.一种基于多形汉逊酵母的白桦脂酸生物合成途径筛选方法,其特征在于:包括以下步骤:
1)运用低能离子注入介导白桦树基因组DNA转化多形汉逊酵母出发菌株;
2)将经过步骤1)处理后的出发菌株涂布于YPD固体培养基,挑取经YPD固体培养基培养所得的菌落于YPD液体培养基中进行发酵,发酵后离心提取发酵液,采用薄层层析对发酵液进行白桦脂酸定性分析;
3)挑取发酵液中存在白桦脂酸的对应菌落于YPD液体培养基中进行发酵,利用高效液相色谱对发酵所得发酵液进行白桦脂酸定量分析。
2.根据权利要求1所述一种基于多形汉逊酵母的白桦脂酸生物合成途径筛选方法,其特征在于:所述出发菌株为多形汉逊酵母H.polymorpha DL-1。
3.根据权利要求1所述一种基于多形汉逊酵母的白桦脂酸生物合成途径筛选方法,其+ 16特征在于:所述低能离子束注入的条件为:注入离子为N ,注入剂量为1.5×10 ~2.5×
1016ions/cm2,注入能量为15~25KeV,脉冲时间为5~10s,间隔时间为5~10s,真空度为1.5~2.0×10-3Pa。
4.根据权利要求1所述一种基于多形汉逊酵母的白桦脂酸生物合成途径筛选方法,其特征在于:所述发酵包括以下步骤:于37℃、转速为200r/min条件下培养60~96h。
5.根据权利要求4所述一种基于多形汉逊酵母的白桦脂酸生物合成途径筛选方法,其特征在于:所述发酵的过程中流加0.5%的葡萄糖水溶液,流速为12.5mL/h。
6.根据权利要求1所述一种基于多形汉逊酵母的白桦脂酸生物合成途径筛选方法,其特征在于:所述薄层层析采用的展开剂为石油醚-苯-乙酸乙脂-冰醋酸混合物,石油醚∶苯∶乙酸乙脂∶冰醋酸的体积比为10∶20∶6∶0.5。
7.根据权利要求1所述一种基于多形汉逊酵母的白桦脂酸生物合成途径筛选方法,其特征在于:所述高效液相色谱的上样样品制备方法为:将发酵液浓缩后利用甲醇进行萃取,将萃取液用滤膜过滤。