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专利号: 2018104926093
申请人: 山东理工大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种心肌钙蛋白I的夹心型光电化学传感器的制备方法,其特征在于,步骤如下:(1)将2.5 cm × 0.8 cm的ITO导电玻璃依次用洗洁精、丙酮、无水乙醇和超纯水超声清洗,氮气吹干;

(2)取8 ~ 10 µL、8 ~ 12 mg/mL的纳米正方片二氧化钛TiO2悬浮液滴加到导电玻璃电极的导电面,室温下自然晾干;

(3)在TiO2修饰的电极表面,滴加4 ~ 5 µL羧基化的硫化镉CdS量子点溶液,室温下晾干,超纯水冲洗电极表面,制得TiO2/CdS电极;

(4)在TiO2/CdS电极表面滴加4   5 µL、0.1 mol/L的巯基乙酸,室温下晾干,继续滴加4 ~ 5 μL的1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺,反应20   40 min~ ~后用超纯水冲洗,自然晾干;

(5)在修饰电极表面继续滴加4   5 µL、浓度为3   5 µg/mL的心肌钙蛋白I抗体溶液,~ ~反应20   40 min后用超纯水冲洗电极表面,4 ℃冰箱中晾干;

~

(6)继续滴加4   5 µL、质量分数为1   1.5 %的BSA溶液,以封闭电极表面上非特异性~ ~活性位点,反应20   40 min后用超纯水冲洗电极表面,4 ℃冰箱中晾干;

~

(7)继续滴加3   5 μL、0.00002   50 ng/mL的心肌钙蛋白I抗原溶液,超纯水冲洗电~ ~极表面,4 ℃冰箱中晾干;

(8)继续滴加4 ~ 8 μL、0.3 ~ 1.0 mg/mL的Ag@Cu2O核壳纳米粒子标记的心肌钙蛋白I抗原的抗体溶液在电极表面与抗原特异性识别,室温下孵化1 h,清洗干净,制得一种基于TiO2/CdS的心肌钙蛋白I的夹心型光电化学传感器,于4 ℃冰箱中储存备用;

所述的1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺含1 × 10-2 mol/L的1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺和2 × 10-3 mol/L的N-羟基琥珀酰亚胺。

2.如权利要求1所述的一种心肌钙蛋白I的夹心型光电化学传感器的制备方法,所述TiO2/CdS的制备,其特征在于,步骤如下:(1)8   10 mL钛酸四丁酯中加入0.6   1.0 mL氢氟酸,搅拌15   30 min,所得溶液移~ ~ ~入聚四氟内衬高压反应釜中,180 ℃反应22   26 h,降至室温,离心、洗涤、真空干燥,得到~TiO2;

(2)把125 µL的巯基乙酸滴加到25 mL的0.01 mol/L CdCl2水溶液中,通氮气20   40 ~min,用1 mol/L氢氧化钠调pH值为11,把2.5 mL的0.1 mol/L硫化钠溶液慢慢注入到溶液中,混合物在氮气的环境下反应4 h,得到羧基化的CdS量子点,4 °C冰箱里储存待用;

(3)取8 ~ 10 µL、8 ~ 12mg/mL的TiO2悬浮液滴加到导电玻璃电极的导电面,室温下自然晾干,继续滴加4   5 µL羧基化的CdS量子点溶液,室温下晾干,超纯水冲洗电极表面,制~得TiO2/CdS。

3.如权利要求1所述的一种心肌钙蛋白I的夹心型光电化学传感器的制备方法,所述Ag@Cu2O 核壳纳米粒子的制备,其特征在于,步骤如下:(1)30   40 mg的硝酸银溶解在180   220 mL的超纯水中,85 ℃回流,搅拌30 min;

~ ~

(2)在(1)溶液中加入4 mL 1%的柠檬酸三钠溶液,煮沸30 min,得银粒子溶液;

(3)在磁力搅拌下,10 ~ 12 g PVP加入到500 mL的0.01 mol/L Cu(NO3)2水溶液中,待粉末完全溶解后,滴加40.0 mL银粒子溶液;

(4)室温下立即加入340 µL N2H4-H2O(35%)溶液,混合物搅拌5 min,用水和无水乙醇清洗Ag@Cu2O核壳纳米粒子,再用无水乙醇分散,4 ℃冰箱中储存备用。

4.如权利要求1所述的一种心肌钙蛋白I的夹心型光电化学传感器的制备方法,其特征在于,用于心肌钙蛋白I特异性抗原的检测,检测步骤如下:(1)使用电化学工作站的三电极体系进行测试,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为辅助电极,所制备的心肌钙蛋白I特异性抗原夹心型光电化学传感器为工作电极,在PBS缓冲溶液中进行测试,PBS缓冲溶液为10 mL   15 mL、pH为5.0   8.5的含0.1 mol/L抗坏血~ ~酸的磷酸盐缓冲溶液;

(2)采用时间-电流法对心肌钙蛋白I特异性抗原溶液进行检测,设置电压为0 V,运行时间100 s,激发光源为LED灯,记录电流变化,绘制工作曲线;

(3)将待测样品溶液代替心肌钙蛋白I特异性抗原溶液进行检测,按照步骤(2)和(3)中的方法进行检测,根据响应光电流强度I和工作曲线,得到待测样品中心肌钙蛋白I的含量。