1.蛋白核小球藻细胞利用木薯渣为主要原料制备生物柴油的方法,其包括如下步骤:
步骤1)微生物混合培养,步骤2)提取油脂,步骤3)制备生物柴油。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤1)微生物混合培养,包括如下步骤:将处于对数生长期的蛋白核小球藻液和里氏木霉种子液接种到含有木薯渣的培养基中,温度为28℃,24小时持续光照,强度为6000-8000Lux,转速为100rpm,发酵时间为2-3天,然后接入黑曲霉种子液,继续培养3-4天,培养结束后,经过离心、洗涤和冷冻干燥后,得到微生物粉末;所述培养基的组成如下:木薯渣50-80g/L,硝酸钠1-2g/L,磷酸二氢钾0.5-1g/L,氯化钠0.1-0.2g/L,七水硫酸镁0.1-0.2g/L,氯化钙50-70mg/L,柠檬酸铁铵20-30mg/L,七水硫酸锌10-15mg/L。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤2)提取油脂,包括如下步骤:将微生物粉末采用脉冲电场处理,然后将粉末添加到氯仿甲醇混合溶液中,添加量为1g粉末:
2ml氯仿甲醇混合溶液,超声提取,然后离心,收集氯仿相,置于氮气中吹干,并且真空干燥,得到油脂。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述步骤3)制备生物柴油,包括如下步骤:
将油脂、脂肪酶以及甲醇按照5ml:1g:6ml的体积比添加到反应器中,催化反应12小时,然后添加占油脂两倍体积的甲醇,继续催化反应20h,终止反应;将反应体系的混合物以
12000rpm离心10分钟,然后将上层液相部分移出,静置分层;取出静置分层后的下层液相,即为生物柴油粗品,再次以12000rpm离心10分钟,,取出上层液相,加入2倍体积50℃的超纯水,充分搅动均匀,再次以12000rpm离心10分钟,静置分层,分离、取出上层有机相,即得生物柴油。
5.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述里氏木霉种子液按照如下工艺制备而得:里氏木霉划线接种在PDA培养基上培养,得到单菌落;挑取单菌落接种到一级种子培养基进行培养,然后接入二级种子培养基培养,获得里氏木霉种子液;所述一级种子培养基和二级种子培养基均为PDA液体培养基。
6.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述蛋白核小球藻液按照如下工艺制备而得:挑取蛋白核小球藻,接种到含有生长培养基的容器中,光照强度6000lux,28℃培养,每天摇动容器2-3次,待生长至对数生长期,得到蛋白核小球藻液;所述生长培养基的组分为:葡萄糖10g/L,氯化铵 2g/L,硝酸钠 1g/L,磷酸二氢钾 0.5g/L,氯化钠 0.1g/L,七水硫酸镁 0.1g/L,氯化钙30mg/L,柠檬酸铁铵20mg/L,七水硫酸锌10mg/L,硫酸锰10mg/L。
7.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述黑曲霉种子液按照如下工艺制备而得:将黑曲霉划线接种在斜面培养基上培养,得到单菌落;挑取单菌落接种到一级种子培养基进行培养,然后接入二级种子培养基培养,获得黑曲霉种子液;所述斜面培养基组分为:马铃薯150g/L,蔗糖20g/L,琼脂15g/L;所述一级种子培养基和二级种子培养基的组分均为:玉米粉50g/L,蔗糖10g/L,硫酸铵5g/L,磷酸二氢钾1g/L,磷酸氢二钾1g/L。
8.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述脉冲电场处理为:电场强度20kV/cm,脉冲宽度4us,处理时间200us。
9.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述超声提取为:提取温度为60-65℃,超声功率为100-200W,提取时间为60-90min。
10.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述氯仿甲醇混合溶液由氯仿与甲醇按照体积比为2:1制得。