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专利号: 2018105327319
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种猪流行性腹泻病毒ORF1基因全序列的扩增方法,所述方法为非诊断目的的方法,其特征在于,包括如下步骤:提取猪流行性腹泻病毒样品总RNA,反转成cDNA,分别利用8个引物对进行PCR扩增反应,分别进行克隆测序,最后拼接序列,得到ORF1基因全序列;

所述8个引物对的上下游引物的序列依次如SEQ ID NO.1~16所示;

所述8个引物对分别为引物对ORF1‑1、ORF1‑2、ORF1‑3、ORF1‑4、ORF1‑5、ORF1‑6、ORF1‑7和ORF1‑8;8个引物对的退火温度分别为:引物对ORF1‑1、引物对ORF1‑6、引物对ORF1‑7和引物对ORF1‑8的退火温度均为62.5℃;引物对ORF1‑2、引物对ORF1‑3、引物对ORF1‑4和引物对ORF1‑5的退火温度均为65℃;

所述PCR扩增反应的程序为:94℃预变性2min;94℃变性10s;退火温度下退火30s;68℃延伸2min;循环35次,72℃终延伸10min;所述退火温度为各引物对各自对应的退火温度。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述PCR扩增反应的体系为:10 µM的上游引物1.0 µL、10 µM的下游引物1.0 µL、2× High Fidelity Master Mix 12.5 µL、ddH2O8.5 µL。

3.权利要求1至2任一项所述方法在捕获猪流行性腹泻病毒变异株在细胞培养传代过程中基因序列变化中的应用。

4.权利要求1至2任一项所述方法在检测病料中猪流行性腹泻病毒中的应用。