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专利号: 2018105792804
申请人: 大理大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 医学或兽医学;卫生学
更新日期:2025-04-15
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种酸枣仁皂苷B脂质体微乳的制备方法,其特征在于,步骤如下:

(1)以酸枣仁为原料,粉碎后采用质量浓度50-70%的甲醇溶液或乙醇溶液热回流提取

2-3次,提取温度80-85℃,每次提取时间1-2h,过滤,合并提取液,减压浓缩回收有机溶剂,得酸枣仁提取物;

 (2)在步骤(1)酸枣仁提取物中加入其体积2-3倍的水,得到提取物混悬液,再加入提取物混悬液质量5-10%的氯化钠,加热搅拌溶解后,将溶液置于1-3℃下静置24h,弃油层得到澄清水层液;

(3)将步骤(3)中水层液经过大孔吸附树脂柱吸附酸枣仁总皂苷,上样流出液为盐类和杂质,水洗树脂柱到流出液为无色,然后用体积浓度70-75%的乙醇溶液解析酸枣仁总皂苷,解析流速1-1.5柱体积/小时,收集洗脱液,回收乙醇浓缩干燥得酸枣仁总皂苷;

(4)将步骤(3)中酸枣仁总皂苷10-12g、N-乙酰葡萄糖胺10-15g、β-葡萄糖甙酶20-50μg放入反应釜中,加纯水200mL,混匀后用冰乙酸调节pH值为5.5-6;然后在氮气保护、50-60℃下密闭反应6-10h,进行酸枣仁皂苷B的半合成,反应结束后升高温度到100℃,灭酶10min,倒出反应液;

(5)用步骤(4)反应液体积1-2倍的正丁醇萃取反应液2-3次,收集合并正丁醇层,旋蒸回收正丁醇,得酶转化反应产物;

(6)采用200-400目硅胶和氯仿湿法装柱,取步骤(5)中酶转化反应产物干法上样,采用氯仿-甲醇-水溶液洗脱,氯仿-甲醇-水溶液是氯仿:甲醇:水按体积比7-5:1.2-1:0.2-0.1的比例混合制得,收集含酸枣仁皂苷B的洗脱液,浓缩回收有机溶剂,浓缩物用丙酮-甲醇溶液结晶,干燥得酸枣仁皂苷B;

(7)将步骤(6)酸枣仁皂苷B制备成质量浓度为15%-25%的酸枣仁皂苷B水溶液,按以下质量比称取:酸枣仁皂苷水溶液10%-15%、肉豆蔻酸异丙酯34-38%、正丙醇22-26%、卵磷脂

27-31%;先将卵磷脂用正丙醇溶解,再加入肉豆蔻酸异丙酯,搅拌均匀后,加入酸枣仁皂苷B水溶液,边滴加边搅拌,添加完后再搅拌1小时,制得酸枣仁皂苷B脂质体微乳;

所述大孔吸附树脂型号为ADS-1600。

2.根据权利要求1所述的酸枣仁皂苷B脂质体微乳的制备方法,其特征在于:β-葡萄糖甙酶酶活300U/g。

3.根据权利要求1所述的酸枣仁皂苷B脂质体微乳的制备方法,其特征在于,步骤(6)替换为:将步骤(5)中酶转化反应产物用水溶解成上样液,采用填料SMB MCI GEL湿法装柱,纯水平衡后上样,梯度洗脱反相层析,洗脱剂为甲醇水溶液,第一梯度洗脱剂甲醇水溶液中甲醇和水的体积比为30-40:70-60,洗脱杂质,第二梯度甲醇水溶液中甲醇和水的体积比为

50-60:50-40,收集洗脱液,浓缩,浓缩物用丙酮-甲醇溶液结晶,干燥得酸枣仁皂苷B。

4.根据权利要求1或3所述的酸枣仁皂苷B脂质体微乳的制备方法,其特征在于:丙酮-甲醇溶液是丙酮和甲醇按体积比5-8:1-1.5的比例混合制得。