1.PLA2抑制剂编码基因的克隆方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤一,从中华大蟾蜍皮肤cDNA文库中克隆获得的SEQ ID No.1、SEQ ID No.3,并将SEQ ID No.1翻译得到氨基酸序列 SEQ ID No.2,将SEQ ID No.3翻译得到氨基酸序列为 SEQ ID No.4;
步骤二,采用PCR扩增:
(1)PCR的模板为中华大蟾蜍第一链cDNA;PCR的引物:上游引物序列:5′‑GGATTTGGTCCACTGCAAAC‑3′,下游引物序列:5′‑CTGACAACCGGAGACACAG‑3′,浓度均为2 pmol/μL;
(2)PCR反应体系为30μL,其中10×Buffer:3μL;10 mmol/L dNTPS:1.5μL;上、下游引物各1.5μL;模板DNA:0.2μL;5 U/μL Taq:0.3μL;灭菌纯水21.7μL;
(3)Taq DNA聚合酶PCR扩增中华大蟾蜍PLI基因片段的PCR程序:95℃变性/20 s,58℃退火/20 s,72℃延伸反应/1 min 30 s,40 个循环。
2.根据权利要求1所述的PLA2抑制剂编码基因的克隆方法,其特征在于:步骤一中的cDNA来自于中华大蟾蜍的皮肤、脑、心、肝、肺、胰、胃、肠、肾、精巢、输卵管、脾中的任一部位。
3.根据权利要求1或2所述的PLA2抑制剂编码基因的克隆方法,其特征在于:克隆过程所列基因序列、基因序列翻译的氨基酸、基因序列翻译的氨基酸所构成的蛋白多肽均可应用于抑制剂的制备。
4.PLA2抑制剂编码基因的克隆方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤一,从日本蟾蜍皮肤cDNA文库中克隆获得的SEQ ID No.5,并将SEQ ID No.5翻译得到氨基酸序列为 SEQ ID No.6;
步骤二,采用PCR扩增:
(1)PCR的模板为日本蟾蜍第一链cDNA;PCR的引物:上游引物序列:5′‑GGATTTGGTCCACTGCAAAC‑3′,下游引物序列:5′‑CTGACAACCGGAGACACAG‑3′,浓度均为2 pmol/μL;
(2)PCR反应体系为30μL,其中10×Buffer:3μL;10 mmol/L dNTPS:1.5μL;上、下游引物各1.5μL;模板DNA:0.2μL;5 U/μL Taq:0.3μL;灭菌纯水21.7μL;
(3)Taq DNA聚合酶PCR扩增日本蟾蜍PLI基因片段的PCR程序:95℃变性/20 s,58℃退火/20 s,72℃延伸反应/1 min 30 s,40 个循环。
5.根据权利要求4所述的PLA2抑制剂编码基因的克隆方法,其特征在于:步骤一中的cDNA来自于日本蟾蜍的皮肤、脑、心、肝、肺、胰、胃、肠、肾、精巢、输卵管、脾中的任一部位。
6.根据权利要求4或5所述的PLA2抑制剂编码基因的克隆方法,其特征在于:克隆过程所列基因序列、基因序列翻译的氨基酸、基因序列翻译的氨基酸所构成的蛋白多肽均可应用于抑制剂的制备。