1.一种双重识别位点糖蛋白表面印迹纳米材料的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1) 聚甲基丙烯酸缩水甘油酯纳米粒子PSG分散液的制备:
将甲基丙烯酸缩水甘油酯GMA、二乙烯基苯DVB和苯乙烯St加入三口烧瓶中,随后加入双蒸水并插入温度计和氮气导管,在氮气氛围下持续搅拌并加热;当温度达到71 ℃时,加入过硫酸钾溶液引发聚合,反应一定时间后,将产物通过离心分离,并用乙醇与双蒸水对产物分别洗涤,随后将产物分散于双蒸水中,得到聚甲基丙烯酸缩水甘油酯纳米粒子PSG分散液,备用;
(2) 表面螯合Cu2+聚甲基丙烯酸缩水甘油酯纳米粒子PSG/IDA-Cu2+的制备:
在三口烧瓶中分别加入亚氨基二乙酸IDA和NaOH,随后加入步骤(1)中得到的聚甲基丙烯酸缩水甘油酯纳米粒子PSG分散液,超声分散后用NaOH调节溶液pH,并将烧瓶置于水浴中,加热反应一段时间后,将产物PSG/IDA通过离心分离并用双蒸水洗涤至中性;将洗涤干净的PSG/IDA分散于双蒸水中,加入CuSO4搅拌溶解,并于室温下反应过夜;最后将蓝色的PSG/IDA-Cu2+用双蒸水洗涤多次,并在真空干燥箱中干燥至恒重,得到表面螯合Cu2+聚甲基丙烯酸缩水甘油酯纳米粒子PSG/IDA-Cu2+;
(3) 双重识别位点表面印迹纳米材料PSG-MIPs的制备:
将步骤(2)中得到的表面螯合Cu2+聚甲基丙烯酸缩水甘油酯纳米粒子PSG/IDA-Cu2+和模板蛋白卵清白蛋白OVA加入烧瓶中,随后加入磷酸PBS缓冲溶液,超声分散后静置,使卵清白蛋白OVA通过螯合作用于粒子表面;而后离心分离并用PBS缓冲溶液对分离出的粒子洗涤多次,直至洗涤液中无法测试出卵清白蛋白OVA;将洗涤后的粒子再次分散于PBS缓冲溶液中,并加入3-氨基苯硼酸APBA,搅拌溶解后缓慢滴入过硫酸铵溶液,室温反应一段时间,将产物离心分离,并用无水乙醇与双蒸水分别对产物洗涤;随后用含有质量浓度为5% SDS的醋酸溶液洗涤产物多次,直至用UV-vis光谱检测不到卵清白蛋白OVA的吸收峰,最终产物用双蒸水洗至中性,并且真空干燥,得到双重识别位点表面印迹纳米材料PSG-MIPs。
2. 根据权利要求1所述的一种双重识别位点糖蛋白表面印迹纳米材料的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述的GMA、DVB、St的用量分别为1.5-3.0 mL、0.05-1.0 mL、0.2-0.6 mL。
3. 根据权利要求1所述的一种双重识别位点糖蛋白表面印迹纳米材料的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述加入过硫酸钾溶液的量为1.5-2.5 mL,浓度为0.03g/mL;所述反应一定时间为6.0-9.0 h。
4. 根据权利要求1所述的一种双重识别位点糖蛋白表面印迹纳米材料的制备方法,其特征在于,步骤(2)中所述的IDA、NaOH和聚甲基丙烯酸缩水甘油酯纳米粒子PSG分散液的用量分别为 1.0-2.5g、1.0-1.5g、100mL。
5.根据权利要求1所述的一种双重识别位点糖蛋白表面印迹纳米材料的制备方法,其特征在于,步骤(2)中所述NaOH调节溶液pH为碱性;所述加热反应温度为70-90 ℃,所述加热反应时间为10-14 h;所述加入CuSO4量为1.0-3.0 g。
6. 根据权利要求1所述的一种双重识别位点糖蛋白表面印迹纳米材料的制备方法,其特征在于,步骤(3)中所述的步骤(2)中得到的表面螯合Cu2+聚甲基丙烯酸缩水甘油酯纳米粒子PSG/IDA-Cu2+和卵清白蛋白OVA的用量分别为 40-60 mg、5-15 mg。
7. 根据权利要求1所述的一种双重识别位点糖蛋白表面印迹纳米材料的制备方法,其特征在于,步骤(3)中所述超声分散前加入的PBS缓冲溶液用量为10-20 mL,pH 为8.5;
所述静置条件为在4℃环境下静置0.5-1.5 h。
8.根据权利要求1所述的一种双重识别位点糖蛋白表面印迹纳米材料的制备方法,其特征在于,步骤(3)中所述再次分散用PBS缓冲溶液的量为10-20 mL;所述加入APBA和过硫酸铵溶液的用量分别为70-85 mg和400-600 μL;所述反应时间为2.0-4.0 h。
9.权利要求1 8中任一项权利要求所述方法制备的双重识别位点糖蛋白表面印迹纳米~
材料,其特征在于,所述纳米材料为单分散纳米材料,所述纳米材料的表面印迹层通过3-氨基苯硼酸氧化自聚形成,印迹空腔位于纳米材料表面;所述纳米材料具有金属离子亲和位点与硼亲和位点的双重识别位点。
10.权利要求9所述的一种双重识别位点糖蛋白表面印迹纳米材料在吸附分离糖蛋白中的应用。