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专利号: 2018106924783
申请人: 安徽工程大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2023-07-19
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种两亲性多肽P13,其特征在于:所述的两亲性多肽P13的氨基酸序列中包括亲水段DGRHHH和疏水段,疏水段由L和A氨基酸组成。

2.根据权利要求1所述的一种两亲性多肽P13,其特征在于:所述的两亲性多肽P13的氨基酸序列为DGRHHHLLLAAAA,分子结构式如下所示:

3.权利要求1或2中所述的两亲性多肽P13的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)将基体树脂浸泡于溶剂中,接着加入N,N-二异丙基乙胺DIEA、天冬氨酸Fmoc-Asp(OtBu)-OH进行接触反应,然后洗涤、封头处理、脱保护,最后洗涤直至茚三酮检测为蓝色以得到二级树脂;

2)将所述二级树脂依次与多种化合物进行多次改性处理得到三级树脂;每次所述改性处理为:将二级树脂与所述化合物在1-羟基苯并三氮唑HoBt、苯并三氮唑-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸盐HBTU的存在下进行接触反应,然后经过脱保护、洗涤直至茚三酮检测为蓝色以得到三级树脂;单次改性处理中的化合物依次独立为Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-His(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Ala-OH;

3)将所述三级树脂洗涤、干燥,然后与切割液进行切割反应以制得所述两亲性多肽P13。

4.根据权利要求3所述的两亲性多肽P13的制备方法,其特征在于,在步骤1)中,所述浸泡至少满足以下条件:浸泡温度为15-30℃,浸泡时间为10-30min;

所述接触反应至少满足以下条件:反应温度为15-30℃,反应时间为0.5-2h。

5.根据权利要求3所述的两亲性多肽P13的制备方法,其特征在于,在步骤1)中,相对于

0.25g的所述基体树脂,所述DIEA的用量为0.3-0.8mL,所述Fmoc-Asp(OtBu)-OH的用量为

0.08-0.49g;

在步骤1)中,所述封头处理采用二氯甲烷DCM、甲醇和DIEA加入体系中进行;相对于

0.25g的所述基体树脂,所述DCM的用量为5-20mL,所述甲醇的用量为0.3-0.8mL,所述DIEA的用量为0.3-0.8mL;

步骤1)中所述溶剂选自DCM、DMF中的至少一者,所述基体树脂选自2-氯三苯甲基氯树脂、Wang树脂、MBHA树脂和Rink树脂中的至少一者。

6.根据权利要求3所述的两亲性多肽P13的制备方法,其特征在于,在步骤2)中,所述接触反应至少满足以下条件:反应温度为15-30℃,反应时间为0.5-2h;

在单次改性处理中,相对于0.25g所述基体树脂,所述HoBt的用量为0.2-0.3g,所述HBTU的用量为0.2-0.5g,所述化合物的用量依次为:所述Fmoc-Gly-OH的用量为0.2-0.6g、Fmoc-Arg(pbf)-OH的用量为0.5-0.8g、Fmoc-His(OtBu)-OH的用量为0.5-0.8g、Fmoc-Gly-OH的用量为0.2-0.6g、Fmoc-Ala-OH的用量为0.2-0.6g。

7.根据权利要求3所述的两亲性多肽P13的制备方法,其特征在于,在步骤3)中,所述切割液由三氟乙酸TFA、三异丙基硅烷TIS、1,2-乙二硫醇EDT和水组成;所述TFA、TIS、EDT和水的体积比为95∶(1.5-2.5)∶(1.5-2)∶(1-2);相对于0.25g的所述基体树脂,所述切割液的用量为10-15mL:在步骤3)中,所述切割反应满足以下条件:切割温度为15-30℃,切割时间为1.5-3h;

在步骤3)中,所述干燥满足以下条件:干燥温度为30-35℃,干燥时间为1-2h。

8.根据权利要求3-7所述的两亲性多肽P13的制备方法,其特征在于,在步骤1)-3)中,所述添料采用过量添加的方式进行,即最大可能的保证反应的充分性,并且多量的试剂不会残留在反应体系内。

9.根据权利要求3-7所述的两亲性多肽P13的制备方法,其特征在于,在步骤1)-3)中,所述脱保护的脱保护试剂由哌啶PIP、DMF组成,所述PIP、DMF的体积比为1∶3-5。

10.根据权利要求3-7所述的两亲性多肽P13的制备方法,其特征在于,在所述切割反应之后,所述制备方法还包括提纯:首先采用冰甲基叔丁醚离心沉降得到粗品,经滤膜过滤后,接着通过色谱柱梯度洗脱法进行二次提纯;其中,梯度洗脱法中洗脱液A:0.1%TFA/H2O,洗脱液B:0.1%TFA/80%乙腈-H2O(V/V);

在所述二次提纯过程中,滤膜孔径为0.25-0.45μm,洗脱时间为0-30min,检测波长为

214nm,柱温为20-32℃,流动相流速1.0-1.4mL/min,进样量3-5mL;

在30min内,梯度洗脱20%B→80%B;

色谱柱选择C18柱,规格可选择10μm,30mm×250mm、3.5μm,4.6mm×250mm、5μm,4.6mm×

150mm。