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专利号: 2018107255368
申请人: 山东师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于氧化石墨烯光热效应的集检测载体与信号产生于一体的温度计检测方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)温度计水银头表面偶联目标待测物抗体

先对温度计水银头表面进行预处理,将处理好的温度计水银头插入到抗体溶液中孵育,清洗,即可;

(2)免疫石墨烯的制备

将目标待测物抗体加入到氧化石墨烯溶液中反应,得到抗体-石墨烯的复合物,即免疫石墨烯;

(3)目标待测物的检测。

2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述步骤(1)的具体操作方法为:

1.1温度计表面预处理

先用清洁剂清洗温度计水银头表面,然后用去离子水清洗,干燥至无水后,将温度计水银头置于Piranha溶液中超声,再用大量的去离子水清洗至水银头表面pH为中性,干燥;待温度计恢复至室温后,将其浸入APTES甲醇溶液中反应;然后用甲醇冲洗温度计水银头,洗去残留的APTES,将温度计放置于烘箱中烘干;

1.2温度计水银头表面抗体的偶联

将目标待测物抗体加到聚苯乙烯样品管中,将步骤(1)处理好的温度计水银头插入到抗体溶液中孵育,用缓冲液冲洗水银头,洗去未结合的抗体。

3.根据权利要求2所述的检测方法,其特征在于,所述步骤1.1中,超声时间为0.5~

1.5h,优选为1h;温度计水银头超声清洗后干燥的条件为60~70℃干燥1.5~2.5h,优选为

65℃干燥2h;反应条件为:室温反应时间2~2.5h,优选为室温反应时间2h;温度计在烘箱烘干条件为50~60℃烘干25~35min,优选为50℃烘干30min;Piranha溶液的体积为20~

25mL;APTES甲醇溶液的质量分数为10%;甲醇冲洗温度计水银头的次数为2~3次,优选为3次。

4.根据权利要求2所述的检测方法,其特征在于,所述步骤1.2中,目标待测物抗体的用量为300~350μL,浓度为3μg/mL;孵育条件为35~40℃孵育1~2h,优选为37℃孵育1.5h;缓冲液为0.01mol/L PBS,冲洗2~3次。

5.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述步骤(2)中反应条件为室温震荡反应5~7h,优选为室温震荡反应6h;目标待测物抗体与氧化石墨烯溶液的体积比为1:1,目标待测物抗体浓度为10μg/mL,氧化石墨烯溶液浓度为200μg/mL;得到的免疫石墨烯在4℃保存。

6.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述步骤(3)的具体操作方法为:将步骤(1)所的表面修饰有目标待测物抗体温度计插入到目标待测物溶液中孵育,用缓冲液冲洗温度计,洗去未结合的待测物;然后将捕获到目标待测物的水银头插入到免疫石墨烯溶液中孵育,用缓冲液冲洗温度计;待其干燥后用激光照射水银头位置,照射前后的温度变化直接通过温度计读数;利用温度升高值与目标待测物数目建立标准曲线。

7.根据权利要求6所述的检测方法,其特征在于,所述在目标待测物溶液中孵育的条件为35~40℃孵育1.5~2.5h,优选为37℃孵育2h;在免疫石墨烯溶液中孵育条件为35~40℃孵育1.5~2.5h,优选为37℃孵育2h;所述缓冲液为0.01mol/L PBS,冲洗3~4次。

8.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述待测物为癌细胞、细菌、大分子蛋白和小分子物质;优选地,所述细菌为沙门氏菌,大分子蛋白为过敏原和癌胚抗原,小分子物质为农兽药残留;优选地,所述抗体可替换为分子印迹聚合物、核酸适配体等识别材料;

优选地,所述温度计可为各种型号的温度计或温度传感器;优选地,所述石墨烯可替换为其他具有光热效应的材料。

9.权利要求1~8任一所述检测方法在检测癌细胞、细菌、大分子蛋白和小分子物质中的应用;优选地,所述细菌为沙门氏菌,大分子蛋白为过敏原和癌胚抗原,小分子物质为农兽药残留。

10.一种温度计水银头表面抗体的偶联方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)温度计表面预处理

先用清洁剂清洗温度计水银头表面,除去表面污垢,然后用去离子水清洗,干燥至无水后,将温度计水银头置于Piranha溶液中超声,用去离子水清洗至水银头表面pH为中性,干燥;待温度计恢复至室温后,将其浸入APTES甲醇溶液中反应;然后用甲醇冲洗温度计水银头,洗去残留的APTES,将温度计放置于烘箱中烘干;

(2)温度计水银头表面抗体的偶联

将目标待测物抗体加到聚苯乙烯样品管中,将步骤(1)处理好的温度计水银头插入到抗体溶液中孵育,用缓冲液冲洗水银头,洗去未结合的抗体;

优选地,所述步骤(1)中,超声时间为0.5~1.5h,优选为1h;温度计水银头超声清洗后干燥的条件为60~70℃干燥1.5~2.5h,优选为65℃干燥2h;反应条件为:室温反应时间2~

2.5h,优选为室温反应时间2h;温度计在烘箱烘干条件为50~60℃烘干25~35min;优选为

50℃烘干30min;Piranha溶液的体积为20~25mL;APTES甲醇溶液的质量分数为10%;甲醇冲洗温度计水银头的次数为3~4次,优选为3次;

优选地,所述步骤(2)中,目标待测物抗体的用量为300~350μL,浓度为3μg/mL;孵育条件为35~40℃孵育1~2h,优选为37℃孵育1.5h缓冲液为0.01mol/L PBS,冲洗2~3次。