1.一种能特异性降解喹诺酮类抗生素的试剂,其特征在于包括:微藻蛋白液和叶绿素锌酸粉末。
2.如权利要求1所述的一种能特异性降解喹诺酮类抗生素的试剂,其特征在于:所述试剂中含有表面活性剂和稳定剂。
3.如权利要求1或2所述的一种能特异性降解喹诺酮类抗生素的试剂,其特征在于:所述表面活性剂为烷基硫酸钠、烷基苯磺酸钠、烷基磺酸钠、脂肪酸钠中的至少一种。
4.如权利要求1或2所述的一种能特异性降解喹诺酮类抗生素的试剂,其特征在于:所述稳定剂为10 12%甘油、2.0 2.3mM EDTA、0.5 0.6mM DTT的混合液,稳定剂的pH为7.6~ ~ ~ ~
7.8。
5.如权利要求1所述的一种能特异性降解喹诺酮类抗生素的试剂,其特征在于所述试剂的制备方法如下:(1)叶绿素锌酸的合成:微藻的藻体破碎后用丙酮萃取,得叶绿素,用NaOH溶液皂化,加入盐酸溶液调pH,然后加入硫酸锌溶液进行取代,溶液有叶绿素锌酸析出,过滤并洗涤;
(2)叶绿素锌酸的一次纯化:过滤反应液,将滤液置于分液漏斗中,加入二氯甲烷反复萃取至萃取液为无色,然后对萃取液进行蒸发浓缩,得浓缩液;
(3)叶绿素锌酸的二次纯化:对浓缩液做薄层层析分离,通过凝胶成像仪观察荧光;用柱层析分离浓缩液,柱层析的固定相为硅胶,流动相为正丁醇、甲醇及蒸馏水,层析后得到叶绿素锌酸的溶液,经蒸发浓缩、干燥后得到浅黄色叶绿素锌酸固体;
(4)小球藻蛋白液的提取:将微藻离心浓缩,然后用超声破碎仪进行破碎,离心,取上清液即为粗蛋白液;
(5)蛋白液的纯化:将粗蛋白液置于饱和硫酸铵溶液中,经层析柱纯化,用氯化钠缓冲液梯度洗脱;合并具有酶活的洗脱液,用磷酸缓冲溶液透析过夜,得纯化后的蛋白液;
(6)试剂的复配:在蛋白液中加入表面活性剂和叶绿素锌酸粉末,搅拌均匀后静置,加入稳定剂,即得能特异性降解喹诺酮类抗生素的试剂。
6.如权利要求5所述的一种能特异性降解喹诺酮类抗生素的试剂,其特征在于:步骤(1)中,所述NaOH溶液的摩尔浓度为0.5 2mol/L,在60 80℃条件下皂化1 2h,用摩尔浓度为~ ~ ~
1 3mol/L的盐酸溶液调pH至2 3,硫酸锌溶液的质量浓度为4 6g/L,在温度为50 90℃条件~ ~ ~ ~下取代1 2h。
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7.如权利要求5所述的一种能特异性降解喹诺酮类抗生素的试剂,其特征在于:步骤(3)中,所述流动相正丁醇、甲醇、蒸馏水的重量比为6 8:3 5:1。
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8.如权利要求5所述的一种能特异性降解喹诺酮类抗生素的试剂,其特征在于:步骤(4)中,所述小球藻在2 4℃、6000 8000r/min的条件下离心8 10min,细胞破碎仪的功率为~ ~ ~
1.0 1.2kW,探头振幅为35 38%,破碎时间为30 45min,破碎后所得液体于2 4℃、10000~ ~ ~ ~ ~
13000r/min条件下离心15 20min。
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9.如权利要求5所述的一种能特异性降解喹诺酮类抗生素的试剂,其特征在于:步骤(5)中,所述层析柱为DEAE Sepharose Fast Flow层析柱,氯化钠浓度梯度范围为100~
700mmol/L,磷酸缓冲溶液的浓度为1.0 1.3mM、pH为7.4 7.6,透析温度为0 4℃。
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10.如权利要求5所述的一种能特异性降解喹诺酮类抗生素的试剂,其特征在于:步骤(6)中,所述表面活性剂和叶绿素锌酸粉末的加入量分别为每20ml蛋白液中加入50 55mg和~
0.5 0.6g,静置时间为30 45min。
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