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专利号: 2018108985033
申请人: 浙江海洋大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种利用海洋细菌发酵制备海绵酸的方法,所述的海洋细菌为糖螺菌(Saccharospirillaceae sp.)LZ‑5已于2017年10月18日保藏于中国典型培养物中心CCTCC,其保藏编号为:CCTCC AB 2017232,其特征在于,所述的方法包括以下步骤:(1)菌株活化:将糖螺菌(Saccharospirillaceae sp.)LZ‑5接种于斜面培养基中,培养活化菌株;培养基配方如下:硫酸铵0.5 1.0g、蛋白胨0.2 0.8g、海藻酸钠0.3 0.8g、磷酸铁~ ~ ~

0.3 0.8g、琼脂2g,加天然海水至100ml,pH6.9 7.3;

~ ~

(2)种子液的准备:挑取活化后的单菌落接种于种子罐中的液体种子培养基,扩培菌株待用;液体种子培养基配方如下:蛋白胨 5g,酵母膏 1.5g,磷酸二氢钾 0.05g,海水 1000 mL,pH 7.0 7.6;

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(3)发酵罐培养发酵:将发酵培养基装入发酵罐中,将步骤(2)中的种子液接入发酵培养基中,发酵得到发酵液;发酵培养基的配方如下:蛋白胨4.5g,酵母膏5.05g,葡萄糖

2.15g,硫酸铵1.35g,磷酸二氢钾0.25g,氯化钠0.52g,氯化亚铁0.005g,脯氨酸 0.05g,海水1000 mL,pH 7.2 7.5;

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(4)发酵液的提取:将发酵液离心经板框过滤,获得菌体沉淀,用甲醇水溶液提取,合并提取液,旋蒸浓缩,得到粗提物;

(5)粗提物的纯化:将上述步骤得到的全部粗提物,经制备色谱洗脱,收集,旋转蒸发,获得白色粉末,即得软海绵酸。

2.根据权利要求1所述的一种利用海洋细菌发酵制备海绵酸的方法,其特征在于,所述的步骤(1)中培养温度为26 29℃,培养时间为1 3天。

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3.根据权利要求1所述的一种利用海洋细菌发酵制备海绵酸的方法,其特征在于,所述的步骤(2)中种子罐通气量55 70L/min,搅拌转速130 160转/min,28℃培养10 14小时,取~ ~ ~

培养物进行镜检,待种子液的OD600 达到0.6  0.8,光镜观察菌体生长良好,无杂菌污染时~

待用。

4.根据权利要求1所述的一种利用海洋细菌发酵制备海绵酸的方法,其特征在于,所述的步骤(3)中发酵培养基的装入量为发酵罐装液量体积百分比的35 50%,种子液按体积百~

分比2.5% 3.5% 的接种量接入发酵培养基中。

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5.根据权利要求1所述的一种利用海洋细菌发酵制备海绵酸的方法,其特征在于,所述的步骤(3)中发酵罐为平叶涡轮搅拌型发酵罐,发酵过程中保持罐压0.15 0.19MPa,搅拌速~

率为150‑160 转/min,控制通气量90 135L/min,发酵温度为27 31℃,发酵时间为40‑42小~ ~

时。

6.根据权利要求1所述的一种利用海洋细菌发酵制备海绵酸的方法,其特征在于,所述的步骤(4)中甲醇水溶液的浓度为80 95%,甲醇水溶液提取次数为3次。

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7.根据权利要求1所述的一种利用海洋细菌发酵制备海绵酸的方法,其特征在于,所述的海绵酸的产率为50 68 μg/L。

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