1.一种酶法制备奥利司他中间体的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）短链醇脱氢酶原始基因的合成：按照大肠杆菌密码子分析用表对短链醇脱氢酶NA‑ADH原始基因序列进行密码子优化，得到优化后的NA‑ADH基因序列，对其进行目的基因的全合成，合成后的全基因两端分别带有NdeI和XhoI酶切位点并连接到pET26b(+)上，获得重组表达载体pET26b‑NA‑ADH，优化后的NA‑ADH基因序列如SEQ ID NO.1所示，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；

（2）短链醇脱氢酶的表达：将重组表达载体pET26b‑NA‑ADH通过热激转化法转到表达菌株BL21 (DE3)中，挑取单菌落，将单菌落接入到含卡那霉素的LB培养液中培养，然后添加IPTG，诱导培养过夜；

（3）细胞破碎：将培养好的菌株离心，收集菌体，重悬菌体后对其进行超声破碎，所得液体即为含重组短链醇脱氢酶菌体破碎液；

+

（4）酶催化：将β‑羰基十四烷酸甲酯加入反应器中，随后，将NAD、含重组短链醇脱氢酶菌体破碎液、含重组葡萄糖脱氢酶菌体破碎液、葡萄糖、磷酸盐缓冲液的混合溶液加入反应器中，进行反应，得到奥利司他中间体（R）‑3‑羟基‑十四烷酸甲酯。

2.如权利要求1所述的一种酶法制备奥利司他中间体的方法，其特征在于：步骤（2）中，将所述单菌落接入到3 7mL含浓度为49 51μg/mL卡那霉素的LB培养液中，在36 38℃条件下~ ~ ~

振荡培养6 12h，得菌种液；每1mL菌种液加入到含浓度为49 51μg/mL卡那霉素的100mL TB~ ~

培养基中，36~38℃下振荡培养至OD600至2.8~3.2，然后添加IPTG至IPTG的终浓度为0.05~

0.15mM，20 30℃下诱导培养6 12h。

~ ~

3.如权利要求1或2所述的一种酶法制备奥利司他中间体的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述LB培养液中含有以下成分的物质：每1L LB培养液中含有蛋白胨5 15g、酵母提取物~

2 8g、NaCl 5 15g，余量为去离子水。

~ ~

4.如权利要求3所述的一种酶法制备奥利司他中间体的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述LB培养液中含有以下成分的物质：每1L LB培养液中含有蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl 10g，余量为去离子水。

5.如权利要求2所述的一种酶法制备奥利司他中间体的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述TB培养基中含有以下成分的物质：每1L TB培养基中含有蛋白胨10 15g、酵母提取物20~

~28g、甘油2~6mL、KH2PO4 2~2.7g、K2HPO4 12~13g，余量为去离子水。

6.如权利要求5所述的一种酶法制备奥利司他中间体的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述TB培养基中含有以下成分的物质：每1L TB培养基中含有蛋白胨12g、酵母提取物24g、甘油4mL、KH2PO4 2.31g、K2HPO4 12.54g，余量为去离子水。

7.如权利要求6所述的一种酶法制备奥利司他中间体的方法，其特征在于：所述培养基的制备方法为：将蛋白胨、酵母提取物、甘油加入900 950mL去离子水中，制成溶液A；将~

KH2PO4、K2HPO4溶于50~100mL去离子水中，制成溶液B；将溶液A和溶液B分别灭菌后冷却至20

60℃混合均匀。

~

8.如权利要求1所述的一种酶法制备奥利司他中间体的方法，其特征在于：步骤（3）中，所述离心时的转速为8000 12000r/min，离心时间为8 12min；用浓度为0.05 0.15M、pH为~ ~ ~

6.8 7.2的磷酸盐缓冲液重悬菌体，菌体与磷酸盐缓冲溶液的固液比1 3g/1mL。

~ ~

9.如权利要求1所述的一种酶法制备奥利司他中间体的方法，其特征在于：步骤（4）中，+

所述混合溶液中NAD、含重组短链醇脱氢酶菌体破碎液、含重组葡萄糖脱氢酶菌体破碎液、葡萄糖、磷酸盐缓冲液的浓度分别为0.08 0.12g/L、10 50g/L、10 30g/L、100 200g/L、0.08~ ~ ~ ~

0.12M，β‑羰基十四烷酸甲酯与混合溶液的固液比为50 100g/L，利用pH自动控制系统和1M ~ ~

Na2CO3溶液控制酶反应的pH为6.8~7.2，在30~35℃反应9~15h。