1.一种羊毛角蛋白皮质细胞的制备方法,其特征在于,步骤如下:
步骤一、采用次氯酸钙/过氧化氢联合去除羊毛表面鳞片层:
(1)将羊毛浸渍在20-25℃的水中,固液比为1:20-25,把羊毛彻底浸湿,加入活性氯含量为70%的次氯酸钙Ca(ClO)2·3H2O,静置5-10分钟,得到体系A;其中次氯酸钙的添加量是羊毛质量的3-5%;
(2)向体系A中缓慢加入质量分数为30%的过氧化氢、作为过氧化物稳定剂的焦磷酸钠、作为过氧化物螯合剂的乙二胺四乙酸,形成体系B;在30-50℃的恒温条件下处理15-30分钟,使羊毛与次氯酸盐和过氧化物进行反应;其中,以体系A中溶液的体积计,质量分数为
30%的过氧化氢的添加量为10-14ml/L,焦磷酸钠的添加量为1-2g/L,乙二胺四乙酸的添加量为1-2g/L;
(3)向体系B中添加亚硫酸钠和质量分数为88%的甲酸,再将pH值调整至3-4,在40-50℃的条件下处理10-20分钟,确保亚硫酸盐离子完全还原体系B中的过氧化物,得到体系C;
其中,亚硫酸钠的添加量是羊毛质量的4-7%,质量分数为88%的甲酸的添加量以体系B中溶液的体积计,为1-2ml/L;
(4)逐渐冷却体系C,将处理后的羊毛进行漂洗,并自然风干,得到去鳞片层羊毛样品;
步骤二、L-半胱氨酸/胰蛋白酶联合处理去鳞片层羊毛样品,定向去除细胞间质,分离皮质细胞,具体过程为:将0.15-0.17mol/L的L-半胱氨酸溶液、去鳞片层羊毛样品和胰蛋白酶混合,形成体系D,在反应温度为30-40℃下,处理20-30h,确保去除细胞间质;其中,去鳞片层羊毛样品与溶液D的质量比为1:25-30,胰蛋白酶与去鳞片层羊毛样品的质量之比为1:10-15;
步骤三、对反应后的体系D进行超声波处理,分离皮质细胞,超声波处理的温度为50-70℃,超声功率400-500W,在工作2s,间隔2s的处理参数下处理20-40min;
步骤四、用120目分样筛网将超声波处理后的溶液进行过滤,去除羊毛纤维状杂质,收集得到滤液;
步骤五、采用孔径为0.45微米的滤膜,对收集的滤液进行抽滤,将固体和液体分离开,未能透过滤膜的固体成分即为羊毛角蛋白皮质细胞;
步骤六、将获得的羊毛角蛋白皮质细胞迅速放入-80℃低温烘箱中冷冻2-6h;
步骤七、将结冰的羊毛角蛋白皮质细胞进行真空冷冻干燥10-30h,得到最终的羊毛角蛋白皮质细胞。